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常见生物相容性实验汇总

细胞复苏

材料准备：

培养基、培养皿、70%酒精、一次性吸管、FBS、15ml50ml离心管

实验步骤：

先将培养基配好并复温，在15ml离心管中加入5ml培养基；准备37℃的水浴，取出冻存管后立即置于水浴中融化，确保细胞全部浸入液面，快速摇动，1min内使管内的细胞融化，注意不要让水没过管口，液氮会从口子喷出，小心。

把培养基融化后的管子用75%酒精擦拭消毒后，放入安全柜内操作。

小心打开冻存管，将细胞悬液转移到有培养基的15ml离心管中。

1200rpm离心3min，弃上清，加入6ml含10%FBS的完全培养基，转移至新培养瓶（小瓶6ml培养基，大瓶10ml培养基）中，做好标记（细胞类型、传代数、培养基、复苏时间、复苏人），置于CO2培养箱中37℃培养，培养24h后视情况换液。

复苏后细胞生长状况正常后，进行常规培养，最好在第二次传代后冻存若干管细胞，不可只取不存，在第三次传代后可用于细胞实验。

TIPS：

解冻细胞必须迅速，防止细胞低温损伤，慢冻速融。

细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

细胞传代（TE消化法）

实验前准备事项：

预热培养用液：把已经配制好的装有培养基、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃

用75％酒精擦拭双手，生物安全柜经过紫外线照射超过30min，实验前通风至少开启15分钟让空气循环起来，橱内不要