类风湿关节炎血清EVs miRNA临床价值及初步机制研究.pdfVIP

摘要

类风湿关节炎（Rheumatoidarthritis,RA）是一种病因尚不明确的复杂遗传

性自身免疫性疾病，其特征是主要影响外周关节的对称性和糜烂性慢性滑膜炎，

在严重的情况下，由于广泛的关节损伤，进而导致终身残疾。目前，RA在中国

人口中患病人数已超过500万人，并且女性的发病率较高。

然而，RA的诊断通常需要结合临床表现、影像学检查和实验室检查等多种

指标，缺乏单一的确诊标志物。RA治疗面临的一个重大临床挑战是15%~20%

的RA患者血清阴性，缺乏典型的自身抗体。由于在识别病情、预测疾病严重程

度和关节损伤方面灵敏度和特异度有限，因此探索和发掘能够满足迫切临床需求

的新型生物学标志物至关重要。

细胞外囊泡（extracellularvesicles，EVs）中的miRNA被发现可以反映疾病

状态并具有诊断意义。本研究筛选并且鉴定能用于RA诊断的血清EVsmiRNA

生物标志物，并且初步探究其潜在的生物学功能，为以后研究血清EVs及其所

包含的异常水平的miRNA对RA诊断和潜在机制提供新的见解。

本研究对18例未经治疗的活动性RA患者和18名年龄和性别匹配的健康对

照者（Healthycontrol,HC）进行了小RNA测序，以确定血清EVs源的miRNA

谱。随后，利用使用逆转录定量PCR（ReversetranscriptionquantitativePCR，

RT-qPCR）的方法在24例RA患者和24名健康对照人群中验证miRNA表达谱。

随后在108例RA患者和103名健康对照者中对筛选出的EVs源性miRNA进行

验证。使用受试者工作曲线（Receiveroperatingcurve，ROC）来评估EVs

miRNA的诊断能力，并采用斯皮尔曼相关（Spearman）方法来研究目标miRNA

与RA的临床指标之间的关联性。通过运用基因本体论（GeneOntologyGO）以

及京都基因与基因组百科全书（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomesKEGG）

的分析方法，确定了miRNA在生物学上的功能以及其信号传递路径。首先，本

研究通过本研究利用电镜观察、纳米粒径分析和蛋白印迹实验，对血清中提取的

EVs进行了形态学、粒径和蛋白质特性的表征。小RNA测序结果表明，RA组

miRNAs含量和丰度较高。本研究通过筛选和验证，鉴定出三个在RA组EVs中

特异性高表达的miRNA：miR-885-5p、miR-6894-3p和miR-1268a,一个低表达的

miRNA：miR-11400。此外，在RA组EVs中上调表达的三个miRNAs联合诊断

的曲线下面积（Areaundercurve,AUC）为0.800，与此同时，低表达的miR-

11400也具有较好的诊断效能，其AUC为0.75。本研究发现miR-885-5p、miR-

6894-3p和miR-1268a与抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-citrullinatedpeptideantibodies,

ACPA）的组合显示出极佳的诊断准确性，AUC为0.963。除了miR-1268a以外，

这些在RA组EVs中特异性表达的miRNAs在血清ACPA阴性的RA患者和HC

组中仍具有很好的鉴别效能。相关性分析显示，miR-11400、miR-885-5p和miR-

6894-3p与临床指标ACPA、C反应蛋白（C-reactiveprotein，CRP）、突变型波形

蛋白抗体（Mutatedcitrullinatedvimentinantibody，MCV）和类风湿因子

（Rheumatoidfactor，RF）等显著相关。与治疗前的RA患者相比，本研究还发

现上调表达的miR-1268a的表达水平在经过甲氨蝶呤（Methotrexate，MTX）治

疗28天后的RA患者血清中显著下调，具有疗效检测的潜能。生物信息学表明，

这些miRNAs参与RNA聚合酶ⅱ启动子转录调节的生物学过程，并且与单纯疱

疹病毒1型感染相关。这些发现强调了miRNAs