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选修3《现代生物科技专题》知识点总结整理版

专题一基因工程

基因工程，又称为重组DNA技术，其核心在于通过人工手段对生物体的基因进行改造和重新组合，从而定向改变生物的遗传性状。这一技术的实现，依赖于一系列关键的工具酶和载体，以及严谨的操作程序。

1.1基因工程的核心工具

1.1.1限制性核酸内切酶（限制酶）

限制酶主要从原核生物中分离纯化得到，其功能是能够识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割磷酸二酯键，产生黏性末端或平末端。这种特异性识别和切割是基因工程中获取目的基因和构建重组DNA分子的基础。

1.1.2DNA连接酶

DNA连接酶的作用是将两个DNA片段连接起来，形成一个完整的DNA分子。它催化形成的是磷酸二酯键，从而将限制酶切割后产生的片段重新缝合。常用的DNA连接酶有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，它们在底物偏好上略有差异。

1.1.3载体

载体的作用是将目的基因送入受体细胞，并使其在受体细胞中复制和表达。作为载体，需要具备多个关键条件：能够在宿主细胞中稳定存在并自我复制；具有一个或多个限制酶切割位点，以便插入目的基因；具有标记基因，便于筛选含有重组DNA的细胞；对受体细胞无害。常用的载体包括质粒、噬菌体衍生物和动植物病毒等，其中质粒是最常用的载体之一，它是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。

1.2基因工程的基本操作程序

1.2.1目的基因的获取

目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因，其获取方法多样。从基因文库中获取是常用方法之一，基因文库包括基因组文库和cDNA文库，前者包含了一种生物的全部基因，后者则只包含了该种生物在特定发育时期表达的基因。利用PCR技术扩增目的基因是另一种高效手段，PCR即聚合酶链式反应，能够在体外快速大量扩增特定DNA片段，其过程包括变性、复性和延伸三个循环步骤，需要耐高温的DNA聚合酶参与。此外，如果基因序列已知，还可以通过化学方法直接人工合成。

1.2.2基因表达载体的构建

这是基因工程的核心步骤。一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等。启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录；终止子则使转录在适当位置停止；标记基因用于鉴定受体细胞是否含有目的基因，以便筛选。构建过程中，需用相同的限制酶切割载体和目的基因，使其产生相同的黏性末端（或平末端），再通过DNA连接酶将两者连接，形成重组DNA分子。

1.2.3将目的基因导入受体细胞

目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化（针对细菌）或转染（针对动物细胞）。不同的受体细胞，导入方法各异。将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体DNA上；此外还有基因枪法和花粉管通道法。导入动物细胞最常用的方法是显微注射法，将基因表达载体注入受精卵。导入微生物细胞则通常采用感受态细胞法，即用氯化钙处理微生物细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。

1.2.4目的基因的检测与鉴定

这一步骤至关重要，以确保目的基因已成功导入并正确表达。首先是分子水平的检测，包括利用DNA分子杂交技术检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因，利用分子杂交技术检测目的基因是否转录出了mRNA，以及利用抗原-抗体杂交技术检测目的基因是否翻译成蛋白质。其次，有时还需要进行个体水平的鉴定，例如通过观察转基因抗虫植物是否表现出抗虫性状来判断目的基因是否有效表达。

1.3基因工程的应用与发展前景

基因工程在农业、医药、环境保护等领域展现出巨大潜力。在农业上，可培育抗虫、抗病、抗逆转基因植物，以及改良作物品质的转基因作物。在医药领域，可用于生产基因工程药物，如利用工程菌生产胰岛素、干扰素等；还可开展基因治疗，即把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。基因工程的发展也带来了一些新的研究方向和技术，如蛋白质工程，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。

专题二细胞工程

细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。根据操作对象的不同，可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。

2.1植物细胞工程

植物细胞工程的理论基础是植物细胞的全能性，即具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能。

2.1.1植物组织培养技术

这是植物细胞工程的基础技术。其过程大致为：离体的植物器官、组织或细胞（外植体），在适宜的营养