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中国药典2025版TSA培养基性能测试标准详解

胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）作为药品微生物检测中核心的基础非选择性培养基，在2025版《中国药典》中地位进一步强化，其性能测试标准较2020版有诸多优化与细化，核心聚焦于“标准化、严控制、强追溯”，全面对接国际通行标准，同时适配国内药品微生物检测的实际需求。本文结合药典通则及相关指导原则，对TSA培养基性能测试的核心标准、操作规范、结果判定及新旧差异进行详细解析，为实验室合规检测提供实操指引。

一、TSA培养基在2025版药典中的定位与核心要求

2025版《中国药典》对微生物检测用培养基的管理体系进行了重要调整，其中最显著的变化是将原“大豆酪蛋白琼脂培养基”统一命名为“胰酪大豆胨琼脂培养基”，与国际通行的SoybeanCaseinDigestAgar命名保持一致，虽配方成分未作实质修改，但体现了标准术语体系的规范化升级[1]。

TSA培养基在药品微生物检测体系中承担着环境监测、微生物限度检查、无菌检查等多重功能，2025版药典在《9203药品微生物实验室质量管理指导原则》中明确规定：所有用于关键检测的TSA培养基，无论其为商品化预制培养基、脱水培养基自配还是按处方配制，均需通过完整的性能测试（适用性检查）方可投入使用，取消了以往“过程受控可仅做单次检查”的豁免条款，凸显了监管机构对培养基质量控制的加严趋势[2][6]。

核心原则：TSA培养基性能测试的核心目标是验证其“无菌性”和“微生物生长支持能力”，确保检测结果的准确性、可靠性和可重复性，所有测试过程需严格遵循药典规定，全程做好记录，实现可追溯。

二、TSA培养基性能测试核心标准（必测项目）

2025版药典明确TSA培养基性能测试分为两大核心模块：无菌性检查和适用性检查，二者均为每批必测项目，且每个灭菌批需进行独立测试，缺一不可[2]。

（一）无菌性检查（首要验证环节）

无菌性检查是TSA培养基投入使用前的前提，目的是确认培养基在制备、灭菌过程中未被污染，核心标准及操作要求如下：

测试样品取样：取灭菌后的TSA培养基，按灭菌批次随机抽取5%的平皿，抽样数量不少于10个；若为批量制备的液体TSA培养基，每批抽取不少于3份样品，每份样品量不低于10mL[1]。

培养条件：将取样后的培养基平皿（或液体样品）置于30-35℃培养箱中培养，培养时间不少于72小时——较2020版的5天培养期缩短44%，但新增了培养温度波动范围的严格控制，要求培养箱温度偏差不超过±1℃，对实验室温控设备提出了更高要求[1]。

操作注意事项：灭菌后的培养基应在洁净工作台内分装，避免二次污染；分装过程中需保证操作规范，防止琼脂凝固不均或污染；若为固体培养基，灭菌后需摇匀，以防琼脂沉积于器皿底部[1][3]。

结果判定：培养结束后，培养基表面（固体）或液体中应无任何可见菌落生长、无浑浊、无沉淀，判定为无菌性合格；若出现任何污染迹象，需立即追溯灭菌参数（标准灭菌条件为121℃、15分钟）、包装完整性及分装过程的合规性，该批次培养基严禁使用[1]。

（二）适用性检查（核心性能验证）

适用性检查是验证TSA培养基支持微生物生长能力的关键测试，2025版药典在保留传统测试菌株的基础上，对接种方法、培养条件和判定标准进行了细化，核心要求是：被测TSA培养基与对照培养基（如中国食品药品检定研究院提供的标准培养基）的菌落计数比值控制在0.5-2.0范围内，同时菌落形态、大小符合规定[1]。

1.测试菌株及相关要求

2025版药典明确规定TSA培养基适用性检查需选用5种标准菌株，涵盖细菌、酵母菌和霉菌，菌株保藏编号、接种方法、培养条件及预期结果特征如下[1]：

测试菌株

保藏编号

接种方法

接种量

培养条件

预期结果特征

金黄色葡萄球菌

CMCC(B)26003

涂布法

≤100CFU

30-35℃，48-72h

圆形凸起，金黄色不透明菌落

铜绿假单胞菌

CMCC(B)10104

倾注法

≤100CFU

30-35℃，48-72h

扁平扩散，蓝绿色荧光菌落

枯草芽孢杆菌

CMCC(B)63501

涂布法

≤100CFU

30-35℃，48-72h

不规则边缘，乳白色粗糙菌落

白色念珠菌

ATCC10231

倾注法

≤100CFU

30-35℃，72h

乳白色光滑酵母样菌落

黑曲霉

CMCC(F)98003

点接种

≤100CFU

30-35℃，72h

绒毛状黑色孢子结构

补充要求：菌株需采用新鲜活化的菌种，工作菌液浓度需严格控制在≤100CFU/mL，稀释后的工作菌液需按规定条件保存，确保菌株活性；若检测真菌类微生物（白色念珠菌、黑曲霉），需额外观察菌落形态特征，新增菌落大小差异不得超过对照培养基±20%的量化要求[1][4]。

2.接种方法的规范操作

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