双酶共固定化及其在连续合成手性胺中的应用.pdfVIP

摘要

近年来，连续流生物催化在制药和精细化工行业获得了广泛的应用。相对于传

统分批搅拌式反应器，连续流动工艺将反应液和生物催化剂分为单个便捷的操作单

元，在减少生产周期时间、降低工厂占地面积和减轻资源浪费等方面具有优势。另

外，由于固定化酶良好的稳定性和可重复利用性，制药行业对连续流工艺的应用也

在逐年增长。

手性胺醇是药物分子和生物活性化合物中普遍存在的重要手性砌块。利用化学

法合成手性胺醇通常需要严苛的条件和昂贵的试剂。生物酶法合成主要分为动力学

拆分和直接不对称合成。而胺脱氢酶（AmDH）可以使用无机氨作为的氨供体在温

和的条件下催化醛、酮类底物不对称高效合成手性氨基醇，该反应具有较高的原子

经济性和立体选择性的。此前已经进行了基因组挖掘筛选得到了来自嗜冷孢子虫的

亮氨酸脱氢酶（SpLeuDH），并针对SpLeuDH的晶体结构（PDBID：3VPX），采用组

合饱和突变技术（CAST）、迭代突变技术（ISM）、单点饱和突变技术（SM）和三密

码子饱和突变技术（TCSM）等半理性设计策略，经过三轮的迭代突变和筛选，获得

了对底物1-羟基-2-丁酮催化性能最高以及立体选择性最好的胺脱氢酶（wh84）突变

体。

在本研究中，利用填充有共固定化胺脱氢酶（wh84）和葡萄糖脱氢酶的填充床

反应器设计了一种连续流动工艺，用于高效生物催化合成（S）-2-氨基-1-丁醇。经过

多种固定化载体的筛选，将两种酶通过共价结合固定于表面含有环氧功能基团的高

分子载体LXTE-706上。固定化的胺脱氢酶（wh84）具有更好的热稳定性、pH稳定

性和溶剂稳定性，且具有较高的活性回收率。在连续流动反应中，（S）-2-氨基-1-丁

醇的转化率和ee高达99%，时空产率高达124.5g/L/d，与批式反应相比提高了6.7

倍。连续反应48小时后，其平均转化率高达91.8%，体现了该系统较高的稳定性以

及工业化生产的潜力，这项研究为胺脱氢酶高效绿色生产手性胺类药物中间体的工

业应用奠定了重要基础。

关键词：连续流动工艺；手性胺醇；不对称还原胺化；胺脱氢酶；共固定化酶。

ABSTRACT

Inrecentyears,continuous-flowbiocatalysishasbeenwidelyusedinthe

pharmaceuticalandfinechemicalindustries.Comparedtotraditionalbatchreactors,

continuous-flowprocessesseparatereactionliquidsandbiocatalystsintoindividual

convenientoperationunits,offeringadvantagessuchasreducingproductioncycletime,

loweringfactoryfootprint,andreducingresourcewaste.Additionally,duetotheexcellent

stabilityandrecyclabilityofimmobilizedenzymes,theapplicationofcontinuous-flow

processesinthepharmaceuticalindustryhasbeengrowingsteadily.

Chiralaminealcoholsareimportantchiralbuildingblockscommonlyfoundindrug

moleculesandbiologicallyactivecompounds.Chemicalsynthesisofchiralaminealcohols

typicallyrequiresharshconditionsandexpensivereagents.Biocatalyticsynthesiscanbe

achievedth