T_NAIA 0368-2025 葡萄酒中4种黄酮类物质的测定 高效液相色谱-串联质谱法.docxVIP

ICS67.160.10

CCSC151

T/NAIA

团体标准

T/NAIA0368—2025

葡萄酒中4种黄酮类物质的测定

高效液相色谱-串联质谱法

Determinationof4FlavonoidsinWinebyLiquid

Chromatography-TandemMassSpectrometry(LC-MS/MS)

2025-03-10发布2025-03-31实施

宁夏化学分析测试协会发布

I

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定编写。

本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞及葡萄酒质量安全））、宁夏化学分析测试协会。

本文件主要起草人：汤丽华、朱燕燕、岳苑、王泽岚、马雪梅、吕毅、李强、吴明、马桂娟、张小飞。

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T/NAIA0368—2025

葡萄酒中4种黄酮类物质的测定高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了葡萄酒中4种黄酮类物质（槲皮素、烟花苷、芦丁、黄芩素）的液相色谱-串联质谱检测方法。

本文件适用于葡萄酒中4种黄酮类物质（槲皮素、烟花苷、芦丁、黄芩素）的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经80%甲醇溶液涡旋超声提取，提取液经分散固相萃取净化，用高效液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。

5.1.2甲醇：色谱纯。

5.1.3甲酸：色谱纯。

5.1.4十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40μm~60μm。

5.1.5无水硫酸镁（MgSO4）粉末：粒径50μm。

5.1.6N-丙基乙二胺（PSA）粉末:粒径50μm。

5.1.70.1%甲酸溶液：取甲酸（5.1.3）1.0mL，用水定容到1000mL，摇匀。

5.1.880%甲醇溶液：取甲醇（5.1.2）800mL，用水定容到1000mL，摇匀。

5.2标准品

4种黄酮类物质中英文通用名称、化学分子式、CAS号、纯度见附录A。

5.3标准溶液配制

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T/NAIA0368—2025

5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取槲皮素、烟花苷、芦丁和黄芩素4种黄酮类标准品10mg（准确至0.1mg），用甲醇（5.1.2）分别溶解并定容至10.0mL，于-18℃避光保存。

5.3.2混合标准中间液（10.0μg/mL）：分别准确吸取标准储备液（5.3.1）0.1mL，用甲醇（5.1.2）定容至10.0mL，于-18℃避光保存。

5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液（5.3.2）适量，用80%甲醇溶液（5.1.8）配制成浓度为10.0ng/mL~500.0ng/mL的标准工作液，临用现配。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。

6.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4离心机：转速不低于8000r/min。

6.5超声波发生器。

6.6有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或性能相当者。

7分析步骤

7.1试样制备

取代表性样品2瓶摇匀分装，冷藏保存。

7.2测定步骤

吸取5.0mL样品于50mL离心管中，加入10mL80%甲醇溶液（5.1.8），涡旋振荡后超声5min，8000r/min离心5min。移取上清液2mL至装有50mgC18（5.1.4）、100mg无水硫酸镁（5.1.5）和30mgPSA（5.1.6）的离心管中，涡旋混合2min，8000r/min离心5min，有机滤膜（6.6）过滤后，待测定。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18色谱柱，2.1mm×100mm，粒径3.5μm或性能相当者