CN104432321A 一种采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法 （杭州元佩特生物科技有限公司）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(43)申请公

(10)申请公布号CN104432321A布日2015.03.25

(21)申请号201410750815.1

C12R

1/245(2006.01)

(22)申请日2014.12.10

(71)申请人杭州元佩特生物科技有限公司

地址310052浙江省杭州市滨江区建业路

511号华业大厦7层739室

(72)发明人阮子琦张哲滔吴渊莫凡

(74)专利代理机构杭州天勤知识产权代理有限公司33224

代理人胡红娟

(51)Int.CI.

A23L2/02(2006.01)C12N15/03(2006.01)

C12N15/01(2006.01)

C12R1/07(2006.01)

权利要求书3页说明书14页

(54)发明名称

一种采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法

(57)摘要

本发明公开了一种采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法，包括：将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和10263分别进行亚硝基胍诱变，然后混合二者诱变后代，进行细胞融合传代培养，并在基因组重排技术基础上进一步采用底物诱导适应性策略，高通量筛选得到高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌；将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变，从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌；将筛选出的纳豆芽孢杆菌和干酪乳杆菌共发酵荔枝汁，得到富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的荔枝汁。本发明得到的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的荔枝汁中，吡咯喹啉醌含量达到84-103ng/mL,纳豆激酶活力达到502-973U/

CN104432

CN104432321A

CN104432321A权利要求书1/3页

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1.一种采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263分别进行亚硝基胍诱变；然后混合二者诱变后代，进行细胞融合传代培养，高通量筛选得到高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌，命名为纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-510;

2)、将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变，从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌LcS-Met;

3)将纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-510和干酪乳杆菌LcS-Met共发酵荔枝汁，得到富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的荔枝汁。

2.根据权利要求1所述的采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的高通量筛选具体包括：①制备2个平板豆芽汁荔枝汁固体培养基，其中一个将小鼠抗PQQIgG单抗PQQ-mAb配入，形成平板A,另一个将琼脂糖-纤维蛋白配入，形成平板B;

②将纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263的诱变融合后代涂布其中一个平板后，再用纤维素膜影印至另一个平板，使平板A和平板B互为影印平板；③平板A中，高产吡咯喹啉醌的诱变融合后代菌落周围形成肉眼可见沉淀圈，根据沉淀圈直径大小可肉眼判断产吡咯喹啉醌量大小；④平板B中，高产纳豆激酶的诱变融合后代菌落周围形成透明圈，根据透明圈直径大小可肉眼判断产纳豆激酶活力高低；⑤平板A与平板B中，高产吡咯喹啉醌菌落与高产纳豆激酶菌落处于同一位置者，即为高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的平板豆芽汁荔枝汁固体培养基以1L计，由以下量的组分组成：

荔枝汁100~150mL;

蔗糖4.0~6.0g;

琼脂1.5~2.0g;

豆芽汁余量。

4.根据权利要求1所述的采用发酵方式制作食疗荔枝汁的方法，其特征在于，步骤2)中，所述的从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌，具体包括：①制备2个平板MRS固体培养基，其中一个将甲硫氨酸配入，为平板C,另一个为单纯MRS固体培养基平板，为平板D;②将诱变后的干酪乳杆菌涂布其中一个平板后，再用纤维素膜影印至另一个平板，使平板C和平板D互为影印平板；③在平板C与平板D的同一位置，平板C出现菌落而平板D未出现菌落，或平板C上的菌落显著大于平板D上的菌落，则该菌落