实验三细胞的传代培养与冻存专家讲座.pptxVIP

试验目标

1.掌握细胞传代培养方法

2.掌握细胞冻存方法

3.建立严格无菌操作观念

实验三细胞的传代培养与冻存专家讲座

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试验原理

传代培养是组织培养常规保种方法之一，也是几乎全部细胞生物学试验基础。

当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长，这一过程就叫传代。传代培养可取得大量细胞供试验所需。

传代要在严格无菌条件下进行。

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试验原理

利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保留，能够使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特征保留起来，这么在需要时候再复苏细胞用于试验，起到了细胞保种作用。还能够利用细胞冻存形式来购置、寄赠、交换和运输一些细胞。

细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%-15%甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在迟缓冻结条件下，细胞内水分透出，降低了冰晶形成，从而防止细胞损伤。采取慢冻快融方法能很好地确保细胞存活。标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

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低温保护剂

细胞直接冻存会造成细胞死亡。必须加低温保护剂。

惯用：二甲亚砜（DMSO）。是一个渗透性保护剂。

机理：可快速透入性别，降低冰点，提升细胞膜对水通透性，延缓冻结过