醋酸纤维素薄膜电泳法.docVIP

附录ⅣA醋酸纤维素薄膜电泳法

试剂（1)巴比妥缓冲液(pH8.6)称取巴比妥2.76g、巴比妥钠

（2)氨基黑染色液称取氨基黑10B0.

（3)漂洗液量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混匀。

（4)透明液量取冰醋酸25ml、无水乙醇75ml，混匀。

测定法取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液(pH8.6)的电泳槽架上，通过滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl,在0.4～0.6mA/cm［总电流量=电流量(mA/cm)×每条膜的宽度（cm）×膜条数］电流条件下电泳；同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离约2cm为宜。电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑或丽春红染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。将洗净并完全干燥的膜条浸于透明液中，待全部浸透后，取出平铺于洁净的玻板上，干燥后即成透明薄膜，可供测定纯度和作标本长期保存。将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪采用反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，以人血清作对照，按峰面积计算各蛋白组分的含量