实验四聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量.pptVIP

实验四聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量;（优选）实验四聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量;二、实验原理;聚丙烯酰胺凝胶的聚合反应;PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类。

连续电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应分离。

不连续电泳系统中缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度具有不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，所分离条带清晰度及分辨率较好。;不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）。

SDS与蛋白质结合后引起蛋白质构象的改变。SDS-蛋白质复合物的形状近似于长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，而长轴则随蛋白质相对分子质量成正比变化。

当SDS与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，并远远超越其原来的电荷，使蛋白质分子间的电荷差别降低乃至消除。

SDS-蛋白质复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，只是蛋白质相对分子质量的函数。;当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：lgMW=K-bX

式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数。

若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋