微课技术：PCR技术与基因技术.pdfVIP

PCR技术和编辑技术

1.RT-PCR（逆转录PCR）

常规的PCR过程是由依赖的聚合酶以作为模板进行扩增的，而逆转录PCR则由依赖RNA的

聚合酶（逆转录酶）来完成。首先，由逆转录酶将RNA单链转录为与其互补的（c），再通过常

规PCR和相应引物进行另一链的合成以及双链的扩增。逆转录PCR是一种很灵敏的技术，可以检测

很低拷贝数的RNA，广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量某种RNA的含量。

2反向PCR

反向PCR是克隆组已知序列旁侧序列的法。其原理是选取已知序列中不存在的内切酶对组进行酶

切，使已知序列和待检测的旁侧序列位于同一片段被切下，然后对该片段进行自身环化。以该环化作为模

板，根据已知序列设计一对反向引物进行扩增，从而获得所需的未知序列信息。利用该技术也可以实现对现有的

环状（如质粒）的线性化。

3.不对称PCR

不对称PCR是利用不等量的一对引物经PCR扩增后产生大量的单链