LexA酵母双杂交系统简介.pdfVIP

LexA酵母双杂交系统简介

一、LexA酵母双杂交系统的设计原理

报告质粒p8op-LacZ的GAL4UAS编码序列被完全去除，因此缺乏LexA融合激

活剂的情况下,报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3,可以作为有

自主复制能力的质粒存于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组DNA上。

质粒pLexA的筛选标志为HIS3，双杂交系统中用于表达DNA-BD2（02个氨基酸残

基组成的LexA蛋白）与目标蛋白（钓饵，Bait的）融合蛋白，该融合体的表达受酵母强启动子

ADH1的调控，选择与报告基因的操纵子LexAx8结合。

质粒pB42AD的筛选标志为TRP1其供外源基因插入的多克隆位点（EcoRI与ho

I上）游，含有SV40核定位S（V40nuclearlocalization）,HA（血凝素）及AD（来自于的88

个氨基酸残基组成的B42蛋白）等几种编码序列,共同组成可以启动报告基因转录表达的激

活成份。