叶绿体提取及荧光成像实验研究.pptVIP

试验五叶绿体的分离与荧光观察

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一.试验目标

1．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的普通原理与方法；了解差速离心Differentialcentrifugation特点与用途

2．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。

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二试验原理

采用差速离心分离细胞器；

沉降次序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体；

叶绿体含有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。

菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察其形态和分布；

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Lowspeed

Highspeed

Differentialcentrifugation

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三、试验用具

1．器材

离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片

2．材料

新鲜菠菜叶

3．试剂

0.35mol/L氯化钠溶液

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四、试验方法

（一）叶绿体的分离与观察

取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。

加入0.35mol/L氯化钠溶液，共150ml，研磨，制成匀浆；

将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中；

取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清；

上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体；

加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀；

取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片：

普通光镜下观察；荧光显微镜下演示

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