蛋白免疫印迹技术解析与应用.pptVIP

蛋白质免疫印迹技术及

常见问题分析;WesternBlot介绍

WesternBlot普通流程

WesternBlot常见问题分析;WesternBlot介绍：;WesternBlot基本原理;

WesternBlot间接法基本原理：

首先利用SDS对蛋白质样品进行分离，然后转移到固相载体（例如NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一种印迹（blot）,用于对蛋白质的进一步检测。

印迹首先用蛋白溶液（如5%的BSA或脱脂奶粉溶液）处理以封闭NC膜上剩下的疏水结合位点，而后用所要研究的蛋白质的抗体（一抗）处理，印迹中只有待研究的蛋白质与一抗特异结合形成抗原抗体复合物，而其它的蛋白质不能与一抗结合，这么清洗除去未结合的一抗后，印迹中只有待研究的蛋白质的位置上结合着一抗。

处理过的印迹进一步用合适标识的二抗处理，二抗是指一抗的抗体，如一抗是从鼠中获得的，则二抗就是抗鼠IgG的抗体。处理后，带有标识的二抗与一抗结合形成抗体复合物能够批示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。

目前有结合各种标识物的抗特定IgG的抗体能够直接购置作为二抗，最常用的一种是酶连的二抗，印迹用酶连二抗处理后，再用合适的底物溶液处理，当酶催化底物生成有颜色的产物时，就会产生可见的区带，批示所要研究的蛋白质位置。该技