基因提取技术与应用解析.pptVIP

DNA制备;第一节天然DNA的制备;二、天然DNA的提取;（1）准备生物材料

选择生物种类；

选择DNA易提取和含量高的组织；

选择DNA得率最高的生长久。

如:

大肠杆菌质粒DNA：应在对数生长久后期。

植物DNA：选幼嫩植株或黄化幼苗（淀粉）。

肝脏DNA：要去除胆囊（酶）。;（2）裂解细胞

这步是关系到能否提取到DNA以及DNA得率高下和质量的核心环节。

结构简单的原核细胞：用溶菌酶，NaOH和SDS，煮沸，冰冻，超声波等方法；

结构复杂的动、植物材料：首先必须粉碎（液氮冻结后研磨，或捣碎机、研钵直接粉碎），再参照裂解原核的方法。;液氮罐;（3）分离和抽提DNA

依据待提取的DNA的性质，使其与细胞内的其它组分分离，从中进一步抽提DNA。

提取总DNA：在裂解液中加适量酚／氯仿／异戊醇或氯仿／异戊醇等有机溶液，使DNA与蛋白质分开，用乙醇或异丙醇处理水相，沉淀DNA，再离心。

提取叶绿体或线粒体等细胞器DNA以及病毒和噬菌体的DNA：须先从裂解液中分离完整细胞器、病毒和噬菌体，抽提前必须经DNase处理，水解附着于其表面的其它DNA。;提取质粒DNA：调整裂解液pH12.6，所有DNA都变性沉淀，再调整pH至中性，质粒DNA复性后从沉淀物中释出。

除RNA：用RNase水解除RNA，

分离抽提DNA最有效的方法：氯化铯梯度离心（氯化铯(CsCl)溶液中加适