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DPPH自由基清除实验教学

一、引言

在抗氧化活性研究领域，DPPH自由基清除实验因其操作简便、灵敏度高、重复性好等特点，被广泛应用于植物提取物、食品、保健品及化妆品等样品的抗氧化能力初步筛选与评价。本实验旨在通过实践操作，使学习者掌握DPPH法测定自由基清除能力的基本原理、实验流程、关键操作技巧及数据处理方法，为深入理解抗氧化机制及相关研究奠定基础。

二、实验原理

DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一种稳定的有机氮自由基，在有机溶剂（如乙醇、甲醇）中呈现深紫色，其特征吸收峰位于517nm左右。当DPPH溶液与具有抗氧化能力的物质（即自由基清除剂）接触时，自由基上的孤对电子被配对，DPPH分子被还原为相应的肼类化合物，溶液颜色由深紫色逐渐变为浅黄色或无色。通过测定反应前后溶液在517nm处吸光度的变化，可以计算出样品对DPPH自由基的清除率，进而评价样品的抗氧化能力。清除率越高，表明样品的抗氧化活性越强。

三、实验材料与仪器

（一）主要试剂

1.DPPH试剂：分析纯。

2.无水乙醇（或甲醇）：分析纯，作为溶剂。

3.阳性对照：如维生素C（Vc）、Trolox（水溶性维生素E类似物）等，分析纯。

4.待测样品：根据实验目的准备，可为植物提取液、果汁、化妆品溶液等。

（二）主要仪器

1.紫外-可见分光光度计：配备比色皿。

2.分析天平：精度0.1mg。