大鼠内皮抑素基因克隆及大肠杆菌表达体系构建与分析.docxVIP

大鼠内皮抑素基因克隆及大肠杆菌表达体系构建与分析

一、引言

1.1研究背景与意义

肿瘤的生长、侵袭和转移是一个复杂且多阶段的过程，其中肿瘤血管生成起着至关重要的作用。当肿瘤体积增长到1-2mm3时，若无新生血管提供养分和氧气，以及排出代谢废物，肿瘤细胞将进入休眠状态或发生凋亡。为了支持自身的快速增长，肿瘤细胞会诱导周围组织形成新的血管，这一过程被称为血管生成。这些新生血管不仅为肿瘤提供必需的养分和氧气，还为肿瘤细胞进入血液循环创造了条件，是肿瘤转移的开端。肿瘤血管生成是一个由各种促血管生成和抗血管生成分子调节的复杂而动态的过程，涉及多种生物分子，如生长因子、趋化因子、粘附因子、蛋白酶、细胞外基质蛋白、转录因子等。这些分子通过跨膜受体激活基因表达，诱导内皮细胞增殖、存活和血管生成。

在众多抗血管生成因子中，内皮抑素（endostatin）备受关注。1997年，O’Reilly首次从小鼠内皮细胞瘤培养液中分离出内皮抑素，它是胶原ⅧC末端的氨基酸片段，分子量约为20KD。内皮抑素特异性蛋白水解酶降解胶原ⅧC末端的蛋白酶敏感区，从而产生内皮抑素。内皮抑素能够直接作用于血管内皮细胞，抑制其增殖、迁移，具有强烈的抑制血管生成活性。研究内皮抑素晶体结构发现，其表面富含精氨酸残基，是肝素结合位点，该位点与其抑制血管生长的功能活性密切相关。许多研究表明，重组内皮抑素特异性抑制内