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分子生物学常用技术（下）研究生及本科生分子生物学实验教学

Contents课程目录分子生物学常用技术体系全景导览，涵盖核酸、蛋白质与细胞层面的核心实验方法。01PCR技术进阶：从定性到精确定量02CRISPR/Cas9基因编辑技术03蛋白质研究核心技术体系04核酸分析与表观遗传学方法05细胞学相关实验技术06技术整合与应用展望

CHAPTER01PCR技术进阶从定性检测到精确定量分析的技术演进

MOLECULARBIOLOGY·TECHNIQUESRT-PCR：逆转录聚合酶链式反应RT-PCR通过逆转录酶将不稳定的RNA转化为cDNA后再进行PCR扩增，是研究基因表达水平的核心技术。其关键在于逆转录引物的选择策略和RNA质量的严格控制，这两点直接决定了后续定量结果的可靠性。RT-PCR实验操作：移液器与PCR管01核心原理：利用逆转录酶以RNA为模板合成cDNA第一链，再以cDNA为模板进行PCR扩增，实现从RNA到DNA的信息转移02引物策略：Oligo(dT)捕获mRNA，随机六聚体逆转录全部RNA，基因特异性引物针对单一靶标03质量控制：DEPC水处理防RNase污染，A260/A280控制在1.8–2.0，凝胶电泳验证28S/18S条带04应用场景：基因表达差异分析、RNA病毒载量检测、cDNA文库构建及mRNA剪接变体鉴定

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