聚合酶链反应技术与基因测序进展.pptVIP

PCR技术及原理第1页

PCR反应原理PCR技术是利用DNA在体外高温时破坏氢键，变性成单链，低温时引物与单链按碱基配对标准结合，再调温至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5′-3′）的方向合成互补链。即：复性延伸变性第2页

PCR反应过程第3页

荧光定量PCR荧光定量PCR是在普通PCR扩增反应进行的同步加入特异性荧光探针（寡核苷酸）两段分别标识一种荧光基团和一种淬灭基团，探针完整时荧光基团发出的荧光被淬灭基团吸收，扩增时Taq聚合酶5′-3′外切酶活性将荧光基团酶切降解，使之分离，从而荧光监测系统收到荧光信号。每扩增一条DNA链就有一种荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与产物形成完全同步。第4页

基因测序技术1.第一代：Sanger链终止法、Gilbert化学降解法2.第二代：454、Illumina、SOLiD3.第三代：HelicoBioSciencePacificBioscienceSMRTTOxfordNanoporeTechnologiesIonTo