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蛋白离心分离收集作业指引

一、离心分离前准备

1.设备检查与校准

确保离心机已通过年度校准，并处于有效期内。检查离心机转子是否与待分离样品匹配，确认转子无腐蚀、裂纹或变形。核对离心管材质是否与样品兼容，特别是对于有机溶剂或强酸强碱样品，需选用耐化学腐蚀的专用离心管。检查离心管盖密封性，防止样品泄漏或气溶胶产生。

2.样品预处理

根据样品特性进行必要预处理。对于细胞培养物，需确认细胞密度和活力，并选择合适的裂解液或缓冲液。对于组织样本，需充分匀浆，确保组织碎片大小均匀。所有样品在离心前需充分混匀，但应避免剧烈振荡产生泡沫，对于蛋白质样品尤需注意，以防变性。

3.平衡操作

使用精密天平进行配平，对称放置的离心管质量差应小于0.1克。对于微量样品，可使用平衡管填充密度相近的缓冲液。平衡时需注意离心管内容物体积不应超过管容量的75%，高速离心时不应超过70%。

4.参数设置

根据目标蛋白的分子量、密度及样品特性，计算并设定离心参数。常用参考数据如下：

分离目标

推荐离心力(×g)

时间(分钟)

温度(°C)

细胞碎片

500-1,000

5-10

4

细胞核

1,000-2,000

10-15

4

线粒体

10,000-15,000

15-20

4

微粒体

100,000-150,000

30-60

4

核糖体

150,000-300,00