74免疫组织化学与免疫印迹技术课件.pptxVIP

免疫检测技术实战7.4免疫组织化学与免疫印迹技术课件研究生、临床病理技师及分子生物学实验人员课程时长90分钟章节数6个章节系列免疫检测技术实战

01·引子IHC与WB：同源不同命——一条路线，两种答案IHC与WesternBlot共享抗原-抗体特异性结合的核心生化原理，结合特异性由Fc段与抗体可变区共同决定。IHC在石蜡包埋组织切片（FFPE）或冰冻切片上原位检测蛋白表达，保留细胞形态与组织微环境结构信息。WB通过SDS按分子量分离蛋白后转印至PVDF或硝酸纤维素膜，实现基于表观分子量的蛋白鉴定。IHC输出的是空间分布图谱，典型分辨率达1–5μm，可在组织切片上直接观察肿瘤浸润与边界。WB输出的是条带灰度信号，可借助ImageJ或ImageLab进行半定量或绝对定量分析。02

02·迷思破除迷思①：IHC只能做定性，WB才能定量——过时了定量IHC（qIHC）通过引入内参抗体与标准化染色曲线，将灰度值转换为绝对蛋白丰度，误差范围控制在10%以内。荧光多重IHC（mIHC）使用Opal信号放大技术，可在同一张切片上同时检测6–8种蛋白，每种通道均可进行单独定量。数字病理扫描仪（如HamamatsuNanoZoomer或Aperio）自动获取全切片图像（WSI），分辨率达0.25μm/像素。H-score由PathologyOutlines提出，计算公式为（1×百