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基因编辑脱靶检测试验规范

一、试验前准备规范

1.样本与试剂质控

基因编辑脱靶检测试验开展前，需对所有试验样本进行全基因组背景核查。对于细胞系样本，需通过短串联重复序列（STR）分型确认细胞身份，排除支原体、真菌及外源病毒污染，确保细胞活率不低于95%。对于动物组织样本，需记录供体的遗传背景、年龄、性别及组织取材部位，避免组织坏死或异质性样本进入试验流程。所有样本需设置平行对照组，包括未进行基因编辑的野生型对照组、假转染对照组（仅转染递送载体不含编辑组分），以及已知编辑效率的阳性参照组，每组生物学重复不得少于3次，技术重复不得少于2次。

试验所用试剂需严格分级质控：CRISPR相关的Cas蛋白、gRNA需通过SDS确认纯度≥95%，通过体外酶切试验验证核酸酶活性，每批次gRNA需通过高通量测序确认合成正确率≥99%，避免合成错误的gRNA引入非特异性切割。聚合酶链式反应（PCR）试剂需验证无外源核酸污染，高保真DNA聚合酶的错配率需低于1×10^-6。文库构建试剂盒需通过标准基因组样本测试，确保建库效率≥80%，接头二聚体占比低于5%。所有试剂需标注批次号、有效期及储存条件，试验全程避免反复冻融。

2.试验方案设计原则

脱靶检测试验需根据编辑系统类型选择适配的检测策略：对于CRISPR-Cas9类核酸酶编辑系统，需同时开展体外脱靶检测和体内脱靶检测；对于碱基编辑、先导编辑等精准