实验十一-食品中黄曲霉毒素B1的检测.pptVIP

实验二十、食品中黄曲霉毒素B1的检测标准依据:GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测定一、实验目的与要求：1、学习酶联免疫(ELISA)方法测定粮食及食品中黄曲霉毒素B1的实验原理，掌握实验的操作要点及测定方法2.了解酶联免疫(ELISA)的工作原理，正确熟练使用酶标仪。二、实验原理：本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，样品中的黄曲霉毒素B1经提取、脱脂、浓缩后与定量特异性抗体反应，多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原结合，加入酶标记物和底物后显色，与标准曲线比较测定含量。三、仪器与试剂（一）试剂盒组成1、AFB1抗原包被16孔×6条形带框酶标板；2、抗体；3、酶标二抗；4、空白对照液；5.底物（1mg×4）；6、底物液A；7、底物液B；8、终止液；9、PBS一T洗液；10、一次性手套。（二）仪器1、酶标仪；2、离心机。四、实验步骤（一)样品中AFB1的提取1．大米和小麦（脂肪含量＜3.0％)：样品粉碎后过20目筛，称取20.0g，加入250m1具塞锥形瓶中。准确加人60mL三氯甲烷，盖塞后滴水封严，150rpm振荡30min。静置后，用快速定性滤纸过滤于50mL烧杯中，立即取12mL滤液（相当4.0g样品)于75mL蒸发皿中。65℃水浴通风挥干。用2.0mL甲醇一PBS(20+80)分三