遗传病的分析5DNA扩增产物的鉴定.pptVIP

遗传病的分析5

DNA扩增产物的鉴定

限制性内切酶酶切技术琼脂糖凝胶电泳技术

PARTONE一、限制性内切酶酶切技术

STEP2STEP1限制性内切酶大多由大肠杆菌中提取纯化得到，能特异性识别和切割双链DNA分子中的特异序列（一般识别4－6个核苷酸序列)由于大多数内切酶具绝对的位点特异性,因此可以选择合适的内切酶切割扩增产物,通过片段大小鉴定基因是否有缺失或缺陷。原理

本实验使用限制性内切酶（LweI)，酶切位点：5′….GCATC(N)5↓…3′3′….CGTAG(N)9↑….5′正常人样品具有酶切位点，能够被酶切开，分成2个片断;而病人组G则被A替代，酶切位点丧失，不能被酶所切动，所以还是１个片断。010302原理

01高速离心机、恒温水浴箱、移液枪、枪头、塑料离心管等02LweI限制性内切酶、三蒸水、缓冲液等器材与试剂

操作1、取样品2份（病人、正常人PCR扩增产物）无菌ddH2O14ul缓冲液10×2ul扩增产物3.5ul内切酶0.5ul2.置37oC水浴3h（或过夜）20ul混匀

内切酶活性的发挥需要Mg2＋。为使酶反应时达到最佳条件,需使用生产厂商提供的反应条件或缓冲液。内切酶需在－20℃环境中保存。注意事项

琼脂糖凝胶电泳技术

原