禽病学实验指导建议(32页).pptVIP

禽病学实验指导建议;试验一 新城疫血凝与血凝抑制试验;器材及试剂:

待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液;待检血清:抗鸡新城疫病病毒阳性血清;

生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。;（一）血凝试验（HA）:取96孔板,按以下步骤操作:

1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照;

2.吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul至第2孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。;3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细

胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀。4、室温静置10-30分,观察结果。

5.结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集病毒最高稀释倍数,作为病毒血凝价,即HI效价,用2n表示。;血凝试验步骤图;（二）血凝抑制试验（HAI）:取一96孔板,按以下步骤操作:

1、4个单位抗原制备:按HA试验测出病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素稀释度。

2.待检血清稀释:第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul,于第一排第1孔中加入50ul待检血清,反复吹吸3-5次混匀后,取50ul至第2孔混匀,吸收50ul至第3孔……,依次稀释至第12孔,弃去50ul,经