蛋白质等电点测定与沉淀反应.pptxVIP

蛋白质等电点测定与沉淀反应

蛋白质的两性电离与等电点等电点是理解蛋白质一切溶液行为的起点从两性电离到净电荷为零的临界状态01

蛋白质是典型两性电解质蛋白质分子同时携带两类可解离基团，是典型的两性电解质。两类可解离基团酸性基团谷氨酸、天冬氨酸的羧基，可发生酸式解离碱性基团赖氨酸的ε-氨基、精氨酸的胍基、组氨酸的咪唑基，可发生碱式解离两类基团同时解离，使蛋白质带电状态随外界pH连续变化。这一属性直接决定溶解度、电泳行为与离子交换吸附，是后续等电点测定与沉淀反应的共同基础。

氨基酸侧链决定电荷性质净电荷是总和：蛋白质整体所带净电荷是所有可解离基团解离状态的总和。等电点是整个分子表面所有可解离基团综合作用的结果——这也是不同蛋白质等电点各不相同的原因。电荷来源酸性侧链天冬氨酸、谷氨酸的羧基在生理pH附近给出质子后带负电碱性侧链赖氨酸的ε-氨基、精氨酸的胍基接受质子后带正电中性可解离组氨酸的咪唑基在中性附近可带正电也可不带电高pH解离酪氨酸的酚羟基、半胱氨酸的巯基在较高pH下也会解离pKa决定倾向

蛋白质在溶液中可两性电离加酸带正电，加碱带负电加酸氢离子浓度升高，碱性基团被质子化，正电荷增多加碱酸性基团被中和，负电荷增多必然存在一个临界pH：不断调节溶液pH，正电荷总数恰好等于负电荷总数时，整个分子呈电中性两性离子状态——这就是等电点概念的雏形。

等电点是净电荷为零的pH