不同6-BA浓度对豌豆茎尖生长组织起源的研究.docVIP

【标题】不同6-BA浓度对豌豆茎尖生长组织起源的研究　 【作者】谭艳玲 【关键词】茎尖??组织培养??胚状体??体细胞胚发生 【指导老师】 【专业】生物科学 【正文】1?引言生物工程包括酶工程、基因工程、蛋白质工程、细胞工程和微生物工程等方面，其中细胞工程又分为动物细胞工程和植物细胞工程两种。植物细胞工程常用的技术手段之一是植物组织培养，它主要是以植物细胞的全能性为理论依据。植物组织培养是生物技术的一个重要领域[1]。它是指通过分离植物体的一个或数个体细胞或植物体的一部分(即外植体)接种到培养基上,在人工控制的条件下进行培养,使其生长为完整的植株[2]。植物组织培养是本世纪发展起来的一门新技术。在20世纪70年代我国开始了植物快速繁殖和无病毒种苗生产的研究。到目前，马铃薯无毒种薯和甘蔗无毒种苗已在生产上大面积种植,?其他植物如兰花、香石竹、月季、菊花、草莓、茶花、苹果、柑桔、枣树、葡萄、半夏、红花、银杏、橡皮树等已进行规模化生产或中间试验[3]。试管苗的年产量也有了巨大的提高。利用组织培养技术进行植物快速繁殖及无病毒种苗生产,?不仅能够获得显著的经济效益,?同时能够挽救珍稀濒危物种和帮助解决药用植物野生资源短缺问题[4-5]。然而目前在我国对豌豆的组织培养的研究还很少，大多是对珍惜品种的研究。豌豆属豆科植物，在全世界的地理分布很广。豌豆种子及荚、嫩苗均可食用，同时豌豆中的营养丰富，可以增强机体免疫力及防癌治癌的功能。豌豆含有的营养物质很丰富，特别是含铜、铬等微量元素较多，铜有利于造血以及骨骼和脑的发育；铬有利于糖和脂肪的代谢，能维持胰岛素的正常功能。豌豆中所含的胆碱、蛋氨酸有助于防止动脉硬化；而且豌豆鲜品所含的维生素C，在所有鲜豆中名列榜首。糖尿病、高血压、冠心病者，老年人、儿童，食豌豆都有好处。豌豆所含植物血球凝集素与莱豆、扁豆所含凝集素的作用类似，能凝集人体的红细胞，促进有丝分裂；能激活肿瘤病人的淋巴细胞，产生淋巴毒素，对各种动物细胞有非特异性的伤害作用，因此具有防治肿瘤的作用。在《本草纲目》中记载，豌豆还具有“去黑黯以及令面光泽”的功效。现代研究更是发现，豌豆含有丰富的维生素A原，维生素A原可在体内转化为维生素A，起到润泽皮肤的作用。现代食疗专家更是赞誉豌豆为“优质降压食品”。同时豌豆主要是粒用，适于加工制作豌豆粉、豌豆糕、豌豆脆等不同食品，也可青食[6]。?由此可见豌豆的经济价值和医疗价值。目前蔬菜市场对豌豆以及工业对豌豆的需求量很大，于是为了提高豌豆的产量和品质，便可采用植物组织培养技术培育豌豆，对豌豆进行快速繁殖或提取需要的化合物，为工业生产提供高质量的品种，为医学培养药用的品种等。植物组织培养的培养基一般采用MS培养基（Murashige和Skoog培养基），它包括大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、植物激素、蔗糖、琼脂等有效成分[7]。MS培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养。与其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。而在培养时加入一定浓度的生长素、细胞分裂素以及激动素能够促进愈伤组织的形成，进而加快胚状体的形成，最终达到缩短培养周期的目的。细胞分裂素（CTK）不仅能促进植物细胞分裂，而且可以调节植物的生长和发育[8]。CTK在离体培养条件下，对于培养细胞的分裂、生长、分化和形态发生等均有重要的作用[9]。谷祝平和郑国倡[10]用红豆草下胚轴外痔体在含KT和6-BA的培养基中培养，可诱导愈伤组织，愈伤组织在仅含6-BA的培养基中产生体细胞胚。周俊彦认为大多数植物是由愈伤组织的表面细胞产生的，即外起源[11]。如文冠果[12]体胚是由胚性愈伤的外层细胞发育而来。张新英等对大豆离体培养下体胚发生的研究表明，大豆体胚起源于子叶表皮及表皮下1~3参细胞，这些细胞脱分化形成的胚性细胞团进一步发育成体胚。但是在伊贝母[13]的组织切片中观察到，除球形胚是生长在愈伤组织的表面外，其余各时期的体胚都处于愈伤组织内部，似乎是内起源。魔芋[14]愈伤组织的组织内部和表面都有体胚的发生，前者为单细胞的内起源，后者为多细胞的外起源。2?实验内容和方法?2.1?实验材料菜场购买的豌豆尖，选取带叶原基的茎尖作为材料，备用。2.2?实验仪器2.2.1?主要仪器表2.1?实验仪器、厂家及型号仪器名称 生产厂家 型号智能型光照培养箱　???????????　?????????????电子万用炉??不锈钢电热蒸馏水器电子分析天平双人单面净化工作台座式自动电热蒸汽灭菌锅电热鼓风干燥箱 上海申安医疗器械厂浙江省上虞市道墟立明化验仪器