江都5178侧耳深层发酵培养基筛选.doc

【标题】江都-5178侧耳深层发酵培养基筛选 【作者】罗 平 【关键词】?侧耳??深层发酵培养基??单因素试验??正交试验??筛选 【指导老师】陈今朝 【专业】生物 【正文】1?文献综述1.1?侧耳侧耳[Pleurotus ostreatus Quél.]在真菌分类学中，属于担子菌纲，伞菌目，口蘑科、侧耳属[1]。我国是认识侧耳最早的国家，早在南宋，就以“天花草”的名称记载在陈仁玉撰写的《菌谱》上[2]。侧耳是我国食用菌中最早实现人工栽培的菌类之一，欧洲在本世纪初才开始用锯木屑进行栽培研究，经过20多年的栽培试验才获得成功[3]。现在，我国已普遍使用农作物的稻秆、棉籽壳、甘蔗渣、废棉和木屑等栽培平菇，栽培方式主要有室内菇床栽培、人防地道栽培和室外阳畦栽培，近年又发展为塑料袋立体栽培和稻田套栽等形式。1.2?侧耳的营养与药用价值侧耳味道鲜美，质地柔嫩、营养丰富，是一种高蛋白、低脂肪的营养食品。平菇含有18种氨基酸，特别是粮食和豆类中通常缺乏的赖氨酸、甲硫氨酸在平菇中都很丰富[3]。长期食用侧耳，有降低血压和体内胆固醇含量的功能，对肝炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性胃炎、尿道炎和胆结石也具有一定的治疗效果[4]。侧耳也是制作中药“舒筋散”的成分之一，尤其是其多糖对肿瘤有抑制作用，侧耳是国际上公认的“保健食品”。早在元代《日用本草》记载，平菇有益气、杀虫作用[4]。1.3?侧耳液体深层发酵1948年美国科学家Humfeld等[5]成功地对蘑菇进行了液体培养，从而揭开了人类进行食用菌液体培养研究的序幕。20世纪50、60年代欧美国家蘑菇生产进入了液体菌种的工业化栽培时代[6]。近年来，日本、韩国等亚洲国家对香菇、金针菇、平菇液体菌种的研究应用已经很深入。许多食用菌生产企业开始使用中小型发酵罐生产液体菌种进行栽培[7]。我国较早从事食用菌液体发酵研究的是上海植物生理研究所陈美聿等[8]人，于1960年进行了香菇液体培养研究。1979年上海师院的杨庆尧[9]开始培养香菇、金针菇等食用菌的液体菌种，并进行栽培试验。黄祖荫[10]在1990采用液体、固体栽培种作比较试验，结果表明液体菌种每平方米可增产鲜菇2.33 kg。高述民等在1993年以玉米粉为液体培养基，接种培养5d后，菌丝生长快、浓白、粗壮和整齐。王怡平等用泥炭经混合酸水解获得的提取液，经1:1稀释后作为侧耳的深层发酵底物，该泥炭提取液中95%的总碳化合物可以被侧耳利用，并生成球形菌丝体，菌丝干质量可以达到7g/L[11]。郭成金等用玉米渣、马铃薯和葡萄糖作为液体培养基制作平菇液体菌种，并进行规模栽培试验，取得了很好的经济效益[11]。因此，侧耳液体菌种发酵具有广阔的应用前景。?我国侧耳栽培研究主要集中在固体袋栽培方面，虽然也有不少关于液体发酵的报道，但总的来说对液体培养的研究尚不深入。由于侧耳液体发酵法比固体培养法有明显的优越性，而侧耳栽培种类繁多，因此，研究江都-5178侧耳液体发酵具有重要的意义。2?试验材料2.1?试验菌种涪陵师范学院生命科学系真菌实验室保存的江都-5178侧耳（Pleurotus ostreatus）。2.2?培养基母种活化培养基：马铃薯（去皮煮汁）20.0%，葡萄糖2.0%，琼脂 2.0%，玉米粉 4.0%，KH2PO4 0.15%，MgSO4 0.050%，维生素B1 0.010 mg/ml，水1000 ml，pH 6.0。碳源试验基础培养基：蛋白胨 1.0%，KH2PO4 0.10%，MgSO4 0.050%，维生素B1 0.010 mg/ml，水1000 ml，pH 6.0。氮源试验基础培养基：葡萄糖 2.0%，KH2PO4 0.10%，MgSO4 0.050%，维生素B1 0.010 mg/ml,?水1000 ml，pH 6.0。无机盐试验基础培养基：葡萄糖 2.0%，蛋白胨1.0%，KH2PO4 0.10%，维生素B1 0.010 mg/ml,?水1000 ml，pH 6.0。??维生素试验基础培养基：葡萄糖 2.0%，蛋白胨1.0%，KH2PO4 0.10%，MgSO4 0.050%，水1000 ml，pH 6.0。2.3?试验试剂本试验过程中所用试剂如表2.1所示。表2.1??试验所用试剂、等级和生产企业???3.?实验设备表3.2详细列出了本试验过程中所用的设备，其它均为实验室常规仪器。表3.2??试验所用设备及生产企业?4?试验设计4.1?母种活化????将母种活化培养基在0.06 MPa，113oC，灭菌20 min。在无菌条件下将江都-5178侧耳母种转接到斜面加富PDA培养基， 25℃恒温培养7 d。4.2?碳源试验在碳源试验基础培养基中分别