非损伤性取样在动物保护生物学中的应用.doc

【标题】?非损伤性取样在动物保护生物学中的应用 【作者】晏正碧 【关键词】非损伤性取样法???动物保护生物学???应用 【指导老师】吴少斌 【专业】生物 【正文】1?前言　??在动物的保护生物学研究中，目前在DNA水平上进行分析是一种十分重要的手段,?而进行DNA分析的首要工作则是分析样品的采集。常用的取样方法有三种，即伤害性取样(destructive sampling)、非伤害性取样(nondestructive sampling)和非损伤性取样(noninvasive sampling)[1]。伤害性取样就是通过杀死动物而获得新鲜的肌肉、肝脏和血液等组织样品，这种取样方法对非珍稀动物来说也许是可行的，而对保护遗传学的研究对象——珍稀濒危动物而言则既不科学也不现实。因此，许多研究者已放弃了该取样方法。非伤害性取样是通过捕获动物来抽取血液、采集毛发或羽毛、耳、尾或趾等分析样品，虽然该方法不至于导致动物死亡，但对动物特别是珍稀濒危动物均会或多或少地造成伤害[1,.2]，而且其取材范围也受到很大限制。据IUCN2004年颁布的红色名录统计，由于人类的滥捕乱猎和环境的不断恶化，全球大约12%的鸟类、23%的兽类、32%的两栖动物濒临灭绝境地[3]，人们迫切要求了解这些动物的生存状况，从而采取适当的保护和管理措施。但是，由于这些物种处于濒危境地，已经不允许对其进行干扰性的取样。正由于这些传统取样法的缺陷，使之不可能在许多珍稀濒危动物的保护遗传学研究中得到广泛应用，即使是对于生存状况良好的物种，进行传统的大规模取样活动也存在技术上和伦理上的障碍[4,5]，加之这些取样法在阿拉伯羚羊(Oryxleucoryx)、麋鹿(Elaphurusdavidanus)和白犀(Ceratotheriumsimum)的研究中受挫而近年出现了非损伤性取样[3]?(Woodruff et al。，1986)。所谓非损伤性取样法，就是在不触及或伤害野生动物本身的情况下，通过收集脱落的毛发或羽毛、粪便、尿液、食物残渣(含有口腔脱落细胞)、鹿角、鱼鳞和卵壳等不同形式的分析样品而进行遗传分析的一种取样方法[1,6]，正因为该方法简便易行且对动物无伤害，使其在动物保护生物学研究领域中得到了极其广泛的应用。本文将就非损伤取样法的概念、方法原理（技术线路）、在动物保护生物学研究中的应用研究进展和前景以及存在的问题进行简要地概述，以便把近十年来在该领域的研究成果构建为一个较为系统的知识框架，为同学们的学习提供理论指导，为他人从事该方面的工作起到一种抛砖引玉的作用。2?非损伤性取样的原理、方法（技术路线）及研究进展2.1非损伤性取样的种类2.1.1粪便的非损伤性取样粪便作为对动物进行非损伤性取样的材料之一，它不仅克服了野生动物数量少、活动范围相对较广、取样难度大、动物肌肉和血液样品在野外难以保存等困难，而且其中所含有的遗传物质能够提供动物分子遗传学、种群生态学和行为生态学等多方面的信息[7]。因此，粪便样品成为动物非损伤性取样中最具潜在价值的研究材料[4]，受到越来越众多研究者的重视。90年代初期，人们将传统的粪便分析方法与分子生物学技术相结合，兴起了一门以动物粪便为实验材料进行动物研究的学科?分子粪便学(Molecularscatology)[8]。近年来，随着科学技术的日新月异和实验手段的不断提高，粪样分析已经在动物的领域、食性消化动态、疾病与寄生虫、种群数量和遗传结构、有效种群大小、食物链与食物网、能量流与物质流等研究方面得到了广泛应用。2.1.2毛发的非损伤性取样　　人们发现人类毛发的毛根中含有足够的DNA，能利用毛根扩增出mtDNA和核基因的某些位点。利用毛发获得DNA的最早报告来自与法医相关的研究，随后该方法迅速在灵长类和熊类等珍稀濒危动物的研究中得到应用[9]。2.1.3口腔脱落细胞的非损伤性取样目前有一个研究小组报道了利用口腔脱落细胞的非损伤性取样分析，即从食物残渣中提取DNA。研究者利用甘蔗饲喂笼养和野生黑猩猩，然后收集其吐出的新鲜食物残渣，再将残渣浸泡于50%的乙醇中，通过离心收集残渣中的口腔脱落细胞，从而获得了足量的DNA用于黑猩猩和其它灵长类的微卫星位点扩增。但是，必须将从食物残渣中得到的细胞保存在螯合物缓冲液或乙醇中，才可以阻止一些酶和其它物质对DNA的降解作用[9]。2.1.4馆藏标本的非损伤性取样馆藏标本包括皮张、骨骼以及浸泡在福尔马林或乙醇中的软组织等，它们之中均或多或少保留了部分DNA，利用一些与濒危种群近缘的已灭绝种群的馆藏标本样品所提供的种群遗传学数据，对解释现生濒危种群的遗传衰退原因有重要的启发作用。由于以前没有较好的方法从中提取DNA，因此这一潜在的DNA来源没有得到很好的利用。随着PCR