生化课件第4章--酶.pptVIP

第三节 酶作用的专一性 酶的专一性就是指酶对它所作用的底物的严格的选择性。即：酶只能催化一种或一类底物,发生一定的化学变化, 生成一定的产物。 基团专一性 二、立体异构专一性 当底物具有立体异构体时，酶只能催化一种异构体发生某种化学反应，而对另一种异构体无作用。 旋光异构专一性 如：乳酸脱氢酶只能催化L-乳酸脱氢变成丙酮酸； D-氨基酸氧化酶只能作用于各种D-氨基酸，催化其氧化脱氨； 胰蛋白酶只作用于L-氨基酸残基构成的肽键或其衍生物。 2.几何异构专一性(顺反异构专一性) 如琥珀酸脱氢酶只能催化丁二酸脱氢生成反-丁烯二酸的可逆反应。 琥珀酸脱氢酶——顺反异构专一性 延胡索酸酶——顺反异构专一性 酶的立体异构专一性有时还表现在能够区分从有机化学的观点看来属于对称的分子 酵母醇脱氢酶：辅酶的尼克酰胺环C4上只有一侧可以加氢或脱氢 米氏方程的三个假设 中间产物学说： E + S ES E + P （1）反应开始， [P]很低，由P+E ES 可忽略不计，即： E + S ES E + P （2） E + S ES为快速反应(快速平衡假说) （3）ES E + P为慢速反应(限速步骤), 反应速度V决定于最慢的一步即 K3 米氏方程推导过程: E + S ES E + P [E] [S] [ES] [E] 游离酶浓度 [E] = [E]t-[ES] ES生成速度 v 1= k1[E] [S] ES分解速度 v 2 = k2 [ES] + k3 [ES] 当稳态时： ES生成速度=ES分解速度 v 1 = v 2 k1 [E] [S] = k2 [ES] + k3 [ES] ＝(k2 + k3) [ES] （7）Vmax和k3(kcat)的意义 在一定的酶浓度下，Vmax为常数。 底物浓度很大时， Vmax与酶浓度成正比 k3表示当酶被底物所饱和时每秒种每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫做转换数（NT），或称催化常数（catalytic constant，kcat） A. kcat/km的意义 在生理条件下，大多数酶并不为底物所饱和。在体内[S]/km的比值通常介于0.01到1.0之间。 k1在水溶液中大约为108~109mol-1·L·s-1，因此kcat/km的上限为108~109mol-1·L·s-1 。 kcat/km作为酶的催化效率的参数，判断酶的催化效率的完整性。 许多酶如磷酸丙糖异构酶的kcat/km介于107~108mol-1·L·s-1之间，说明它们已达到最佳的酶催化效果 Eisenthal和Cornish-Bowden直接线性作图 把[S]标在横轴的负半轴上，测得的v数值标在纵轴上，相应的[S]和v联成直线，这一簇直线交于一点，这一点的坐标为Km和Vmax。直线性作图法有其优点，不需要计算，可直接读出Km和Vmax值；另外它使人们容易识别出那些不正确的观测结果，这些结果将产生不通过靠近共同交叉点的直线 竞争性抑制的特点： I与S分子结构相似； Vmax 不变，表观Km增大； 抑制程度取决于I与E的亲和力 ，以及[I]和[S]的相对浓度比例，能用增大[S]的办法克服。 竞争性抑制 非竞争性抑制的特点： 1、I与S分子结构不同； 2、Vmax 减小，表观Km不变； 3、抑制程度取决于[I]大小，不能用增大[S]的办法克服。 举例：胰凝乳蛋白酶 1.酶特征：3条肽链（A,B,C），5个-S-S-,由1条肽链 245AA的酶原激活后形成的。 2.活性中心：位于两条平行肽链的裂隙中，适合芳香族侧链进入。 催化基团：Ser195、 His57 、 Asp102(也参与底物结合） 一些酶活性中心的氨基酸残基 酶 残基总数 活性中心残基 牛胰核糖核酸酶 124 His12, His119, Lys41 溶菌酶 129 Asp52, Glu35 牛