茎瘤芥“涪丰14”DNA提取优化方案.docVIP

【标题】茎瘤芥“涪丰14”DNA提取优化方案 【作者】钟定华 【关键词】茎瘤芥? CTAB? SDS? DNA 【指导老师】江波 【专业】生物科学 【正文】1.前言涪陵区是榨菜的发源地和集中产地，被誉为中国的榨菜之乡。因此“涪陵榨菜”为涪陵特产，具有独特的品味和浓烈的地方特色。它与欧洲的酸黄瓜、甜酸甘蓝并称世界三大名腌菜。具有防癌抗癌、下气消食、利尿除湿等各种食疗功能茎瘤芥（Brassica juncea var. tumida Tsen et Lee）便是“涪陵榨菜”的原料植物。涪丰14号是近年来研究工作者在茎瘤芥类植物的利用中培育出来的一种新品种。茎瘤芥植物可以制成各种芥菜鲜销供食，又可进行加工腌制，不仅畅销国内，还可出口国外。其分布范围较广，栽培历史悠久，是我国传统的鲜食和加工蔬菜。目前已经成为重庆蔬菜生产和食品加工行业的一大主要产品，在农业经济中具有重要地位和产业优势。目前前辈们主要从育种、栽培和加工三个方面对茎瘤芥开展研究，从微观分子水平上的研究尚属贫瘠地带。然而要探究“涪陵榨菜”这个地方特色到底是来自于加工工艺还是源于原材料本身，却只能从DNA分子水平上深入研究才会有结论。但是探讨茎瘤芥的分子特性，建立基因文库、进行RAPD鉴定、微卫星标记等分子生物学操作都首先需要高质量的基因组DNA。为获取高质量的涪丰14号总DNA，开展涪丰14号基因组总DNA的提取研究便显得举足轻重。2.文献综述茎瘤芥系十字花科芸苔属芥菜种的一变种植物，又名榨菜，俗称青菜头，为双子叶植物纲，十字花科，芸苔属，芥菜种，叶芥亚种，大叶芥变种的变种，二年生蔬菜。原产于我国，以西南、华南、华东等地区栽培最为普遍，种类繁多，品种资源极为丰富。涪丰l4是重庆市涪陵区农科所培育出的榨菜新品种，株高50-60厘米，展开度65-70厘米，叶倒卵形，叶色深绿，中肋上无蜡粉，出苗至现蕾160～165天，具有适应性强、耐肥、耐病毒、抽薹晚、瘤茎含水量低，皮薄、丰产性好的特点，适宜川东长江两岸500米以下种植，在四川和重庆各榨菜区种植一般亩产2500-3000千克，高产栽培可达到3500千克[1]。涪丰14(原代号“014”)：系涪陵地区农科所1986年从涪蔹市世忠乡邓家村榨菜地方品种?柿饼菜?变异群体中经系统选育而戚，1992年3月通过四川省农作物品种审定委员会审定并定名．涪丰14号播期弹性大，不易早期抽苔．丰产性好，产量高．一般亩产2000-2200公斤，高产栽培可达3O00公斤以上，平均亩产比蔺市草腰子增产2O-30％?；耐寒耐肥抗病毒病?病情指数低(2．66％)，菜形美观，菜头古水量低，脱水速度较快(不及蔺市草腰子)，加工成菜高(3l-32％)，品质优。近年来涪丰14号的研究主要集中在育种、栽培和加工三个方面：在育种方面，数量性状遗传力、遗传变异和遗传进度是作物性状遗传研究的主要内容。通过这些遗传参数的研究，初步揭示和分析茎瘤芥地方品种群体的选择潜力和预期效果，并正确进行选择，提高育种效果，加快新品种、新材料创新进程[2]。在栽培方面，国内研究主要停留在栽培技术[3]和病害的防治[4]两方面：一方面通过品种对比选择优良品种[5]、适地适时播种[6]、合理密植[7]及肥料组合[8]，另一方面通过防治对榨菜原料作物茎瘤芥的危害越来越重的十字花科植物病毒病、根肿病、霜霉病、根腐病、真菌性软腐病和细菌性软腐病[9]，从栽培技术和病害的防治两方面来提高茎瘤芥生产的产量和质量。在加工方面的研究比较多，主要利用传统的腌制技术将榨菜制成高质量、多品种的低盐榨菜和榨菜软罐头以改善榨菜制品的营养价值、安全性和品质，同时可节约生产成本。茎瘤芥的各种品种微观分子水平上的研究很少，而茎瘤芥基因组DNA提取研究又是开展分子水平研究的首要关键一步。DNA是遗传信息的载体,快速提取高分子量、高纯度的DNA是进行遗传转化、基因文库的构建、核酸分析等研究的前提。如何简捷有效地提取到纯净、合格的大分子双链DNA,一直是植物技术研究者关注的问题。近年来对植物DNA的提取提出了多种方法,主要的方法有高盐低pH?法、尿素法、CTAB?法、SDS?法、PVP?法和CTAB?- SDS?结合法等不同方法提取总DNA。与动物细胞相比,植物细胞除了有细胞壁外,还有大量的多糖、脂质、色素和酚类物质,为DNA的提取与纯化带来了很大的困难[10?]?。提取植物DNA常用的试剂主要是CTAB?(十六烷基三甲基溴化铵)?和SDS?(十二烷基磺酸钠)?。 CTAB和SDS都可以破坏植物细胞膜,以有利于细胞内容物的释放。此外CTAB可与核酸结合形成复合物,有利于将DNA与变性蛋白质及多糖分开, SDS可与蛋白质、多糖形成复合物,经离心与DNA分开[11]?。不同的植物材料应采取不同的DNA