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实 验 一 一、内 容 1.介绍实验室规则 2.检查细菌动力(1份/人) 3.细菌涂片制备及革兰染色法（1份/人 ) 4.细菌基本形态、特殊结构(示教) 5.显微镜的使用及维护（讲解示教） 6.微生物实验的基本操作技术(录像） 二、用具 混合菌液（3支/桌）、 载玻片、盖玻片、二甲苯、变形杆菌（2支/桌）、示教片（淋球菌、链球菌、伤寒杆菌、破伤风示芽胞、产气荚膜杆菌示荚膜、伤寒杆菌示鞭毛） 革兰染液2套、显微镜、镜油 1.通过实验可以加深对理论知识的理解及验证理论课讲述的内容 2.通过实验，学会微生物学实验的基本操作技术。树立“无菌”的意识 3.培养实事求是的科学态度，正确分析问题和解决问题的能力 细菌涂片制备、革兰染色： 染色 待玻片冷后再进行染色 动力检查法有两种：悬滴法、压滴法 细菌基本形态 球菌 杆菌 螺形菌 特殊结构： 　荚膜： 芽胞： 鞭毛： 菌毛： 实验报告要求： 革兰染色法的材料、步骤、结果 （绘图）、意义 压滴法的实验方法、结果 特殊结构（绘图） ? 球 菌 杆 菌 螺形菌 弧菌 螺菌 弧菌 螺菌 肺炎链球菌荚膜 荚膜 产生芽胞的都是革兰阳性菌 芽胞的大小、形状、位置等随 菌种而异，有鉴别意义。 炭疽芽胞杆菌 破伤风梭菌 肉毒梭菌 鞭毛菌分类 单毛菌 丛毛菌 双毛菌 周毛菌 许多革兰阴性菌和少数革兰阳性菌菌体表 面存在着一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物，与细菌的运动无关。必须用电子显微镜观察。 分为 性菌毛 普通菌毛 * * 目 的 掌握油镜的使用及细菌观察方法； 掌握细菌特殊结构及其意义； 掌握细菌涂片制作及革兰染色方法、原理及意义； 熟悉微生物学实验室规则， 了解细菌特殊结构的检查方法； 一、实验室规则 书包和衣物等挂于室外，必需带入的用具及书籍，放在抽屉中，以免污染； 进入实验室内穿实验衣，戴帽子，无菌操作时要戴口罩； 微生物实验室内禁止饮食、吸烟或用嘴湿润铅笔及标签等； 保持实验室内安静、整洁和有秩序； 实验中应安指定地点放各种物品，如吸过菌液的吸管、毛细吸管应放于含2－3％来苏的玻璃筒中。用过的玻板及L形棒应放含消毒液的塘瓷缸内，不能放在桌上或冲于水槽中； 要爱护公物，节约使用实验材料。器材如不慎损坏，要报告老师； 涂片 干燥 固定 结晶紫1分钟 水洗 碘液1分钟 95%酒精脱色 稀释石炭酸复红30秒 干燥 油镜观察 水洗 水洗 水洗 涂片 1平方厘米 生理盐水+斜面培养物 肉汤培养物 （1） 室温下自然干燥 （2） 火焰上方10厘米处烘干 干燥 玻片涂面向上，来回通过外火焰3次 固定 结晶紫1分 水洗 细水冲洗至冲下的水不显色 碘液1分 水洗 细水冲洗至冲下的水不显色 95%酒精脱色 酒精脱色至滴下酒精无色或淡紫色为止 水洗 细水冲洗至冲下的水不显色 稀释石炭酸复红30秒 水洗 细水冲洗至冲下的水不显色 干燥 用吸水纸 革兰染色法的原理： １.渗透学说： 革兰阳性菌细胞壁粘肽层厚，酒 精不易渗入脱色；革兰阴性菌相 反。 　　 　　 ２.化学学说： 革兰阳性菌含较多核糖核酸镁 盐，与结晶紫和碘结合成大分子 化合物，不易脱出；革兰阴性菌 相反。 ３.等电点学说： 革兰阳性菌（pH2-3）带阴电荷 多，与硷性染料结合牢固；革兰 阴性菌（pH4-5）带阴电荷少，与 硷性染料不易结合。 油镜观察 结果 革兰阳性G＋：紫色 革兰阴性G— ：红色 意 义 鉴别细菌 指导用药 细菌致病性 有关 G+ 外毒素 了解细菌生 物学特性 G- 内毒素 G+ 紫 色 G- 红 色 G+ 青霉素 G- 链霉素 球 菌 杆 菌 不产生气泡 高倍镜观察 细菌鞭毛运动与 布朗运动的区别 鞭毛运动： 定向地由一个 地方泳动到 另一个地方 布朗运动：由于细菌个体 微小，受到所处环境中液 体分子的冲击，而呈左右 前后，位置变更不大的 颤动