风湿性疾病的自身抗体.docVIP

风湿性疾病的自身抗体 北京协和医院 唐福林 自身抗体是指自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，见于多种风湿性疾病，尤其在弥漫性结缔组织病中更为常见。目前用于临床的常见自身抗体有抗核抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体、抗磷脂抗体、类风湿因子、抗线粒体抗体等。 自身抗体有多种检测方法，包括间接免疫荧光法（IF）、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、被动血凝法（PHA）、颗粒凝集法（PA）、对流免疫电泳法（CIE）、免疫双扩散法（ID）等，针对可溶性成分（如ENA、DNA、凝血因子、补体）可采用ID、CIE、ELISA、RIA法测定；针对不溶性成分可采用间接免疫荧光法。 不同检测技术的敏感性和特异性存在差别。目前各单位已采用的多种自身抗体检测方法尚未标准化，因此某一实验室结果难与另一个实验室所测结果进行比较从而造成了误判、误导。判断某一诊断试验应从四个特性（敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值）来评价其效用。对于自身抗体的检测常常因为其存在精细复杂的免疫化学反应而出现交叉反应。必须指出，少部分正常人有低滴度的自身抗体，故不能仅凭某一种自身抗体的存在而诊断为某一特定的疾病。如同分析任何检测结果一样，自身抗体的阳性或阴性不是诊断的唯一条件，必须分析检测方法的可靠性，必要时多次重复检测或多家实验室检测，只有密切结合临床对检验结果进行分析才能得出正确的诊断。 抗核抗体（Autoantibody to Nuclear Antigen,ANA） 一．定义：传统认为抗细胞核内成分的抗体称为ANA，这一概念强调了细胞核的重要性，因为细胞核内有DNA、RNA、碱性组蛋白、非组蛋白、磷脂及各种蛋白酶等复杂的化学组成，决定了ANA存在不同的成分，因此，构成了抗核抗体谱（ANAs）。随着免疫荧光技术的改进，先进的免疫学技术的应用和分子生物学的发展，目前对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸（nucleic acid）和核蛋白（nucleoprotein）抗体的总称。故现在对ANA靶抗原的理解已从传统的细胞核扩大到整个细胞。ANA在许多风湿性疾病，如系统性红斑狼疮、硬皮病、干燥综合征、类风湿关节炎等均可阳性，因此是诊断弥漫性结缔组织病的筛选抗体。健康老年人、感染性疾病和服用某些药物（普鲁卡因酰胺、肼苯哒嗪、苯妥英钠、异烟肼等）的患者均可有ANA阳性。 1954年Hargrave发现LE细胞奠定了当今ANAs的基础。已知LE因子即是ANA，它是一种抗DNA-组蛋白（DNP）复合物的抗体，目前已采用简易和迅速的抗DNP抗体测定取代LE细胞的检查。 二．测定原理和方法：常规检测ANA的方法是以鼠肝和鼠肾为底物的间接免疫荧光法。由于某些抗原如SSA/RO、Jo-1、rRNP等在细胞浆内比核内含量多，因此，鼠肝或鼠肾作底物检测常呈阴性反应，为弥补这一不足，国外以核质丰富的Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物提高了ANA检测的阳性率。对于ANA阳性的标本，应排除实验过程中血清洗脱不尽或标有荧光素的抗人免疫球蛋白浓度过高而造成的假阳性。必须强调指出，待测血清标本一定要稀释，因为低滴度的ANA可在感染性疾病、肿瘤及正常人中出现。未加稀释的正常人血清可有1/3的呈阳性ANA反应。ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。对于ANA阴性的标本，要考虑是否有底物保存不当或操作过程中造成的误差，抑或药物治疗后病情缓解所致。ANAS的荧光染色型别有五种。（1）均质型：核质染色均匀一致，此型与抗组蛋白抗体和抗DNA抗体有关；（2）斑点型：核质染色呈斑点状，核膜存在，此型多与可溶性核抗原（ENA）抗体有关；（3）核仁型：仅核仁着染荧光，与4—6SRNA抗体相关，在硬皮病中较多见；（4）核周（核膜）型：荧光包绕在核膜周围，多与抗双链DNA抗体有关；（5）着丝点型：处于分裂时相的Hep-2细胞为底物可出现依着丝点散在排列的特殊点状圆形，与斑点型区别的重要之处在于前者核膜已消失，主要与雷诺现象有相关性。荧光染色核型可随血清稀释的改变而发生改变，如均质型的ANA在血清稀释后可出现斑点型和核周型。对于ANA阳性的标本，应采用对流电泳法、免疫双扩散法、酶联免疫吸附法（ELISA）或放射免疫法、免疫印迹法等识别出确切类型，因不同种类的ANA有其不同的临床意义。 三．ANAS的分类： 根据细胞内各分子的理化特性和分布部位，将ANAs分为四大类，简述如下： （一）抗DNA抗体 又可分为单链（变性）和双链（天然）DNA抗体。抗单链DNA（SSDNA）抗体在多种疾病中及正常人血清中存在，因此无特异性，临床上价值不大。抗双链DNA（dsDNA）抗体对诊断系统性红斑狼疮（SLE）有较高的特异性，尤其在活动期SLE病人血清中有滴度较高的抗dsDNA抗体，随着疾病活