结核菌抗原酶免疫检验试剂.pptVIP

* 结核菌抗原酶免疫检验试剂 简介 结核病的感染途径主要是经由空气中飞沫传染，而造成结核病的主要致病菌为结核菌(Mycobacterium tuberculosis)，根据世界卫生组织的报告，目前每年约有8百多万的结核病新增病例，且每年约有3百万人因结核病死亡，而全世界约有33%的人口为潜伏性结核病，因此如何快速正确的诊断出结核病是非常重要的。 目前在临床上对于结核病的诊断主要是依据X光片检查，配合显微镜观察及细菌培养等方法，这些传统的诊断方法不但费时且检测率低，将延误了早期发现及早期治疗的最佳时机。近几年来，从血液中检测结核菌抗体一度被认为是一种快速且方便的检测方法，但此方法的灵敏度和特异性都不如预期。结核菌被发现可以刺激体内T细胞产生免疫反应，所以利用结核菌的纯化抗原(Tuberculin purified protein derivate, PPD)来做成结核素皮肤测试(Tuberculin skin test, TST)的快速结核病检验方法已经有50于年的历史，此方法也常被用于全国性的结核菌感染调查，但此方法的最大缺点在于PPD会与曾接受过卡介苗(BCG vaccine)的人发生交叉反应，造成伪阳性的结果。 为增加结核病检测的特异性，近年来不断有研究在寻找结核菌特异性抗原，Mahairas等人利用了基因杂交反应比对出致病性的结核杆菌属和BCG菌株在某些基因是有所差异的，这些在BCG菌株上所不存在的基因群分别被命名为RD1、RD2及RD3 (region of deletion)，在这个特异性的基因群中会表现一些分泌性的蛋白质，经研究发现这些分泌性蛋白质在菌体生长的早期就会以外泌的方式释放到培养液中，且部分蛋白质属于T细胞辨识抗原，可引起细胞免疫反应的发生。 ? 为开发准确性更高的结核病筛检试剂，台塑生医科技股份有限公司挑选了二个在此基因群上高特异性的抗原，利用基因工程技术表现获得基因重组蛋白，并制造其单珠及多株抗体，成功研发台塑结核菌抗原酶免疫检验试剂。本试剂是目前全世界唯一可由体液中检测结核菌分泌代谢物的试剂。检验过程于2小时内直接检验并定量体液中结核菌代谢物的浓度。 酶联免疫吸附分析法 结果 图一、重组蛋白质电泳分析图。X蛋白质(a)，Y蛋白质(b)的表现及纯化，泳道：1, 诱导前大肠杆菌体；2, 诱导后大肠杆菌体；3, 可溶性蛋白质；4, 不可溶性蛋白质；5-9, 纯化后第1-5管流出液。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 a. b. 10 15 25 55 10 15 25 55 原理 M. tuberculosis Antigen ELISA 优点 体液中抗原检测 总代理:北京汉和宇科技有限公司 地址：北京市海淀区北三环西路48号科技会展中心1号楼B座10P（100086） E-mail:jacklee@ 电话：010222/333 传真：010 方便性：操作方法简单，不需特殊仪器设备 效率性：检体不需前处理，二小时即可完成 安全性：非侵入性体外检测 特异性：不会与非致病性结核杆菌属或BCG菌发 应用性：可用于肺内及肺外结核检测 生交叉反应 结核菌抗原酶免疫检验试剂 菌种 培养液测试数量 阳性结果 : 酶联免疫吸附分析法 聚合酶连锁反应法 M. tuberculosis M. abscessus M. intracellulare M. chelonae 27 27 27 1 0 0 1 0 0 2 0 0 表一、以台塑结核菌抗原酶免疫检验试检测培养液 并与聚合酶连锁反应测试结果比较 总结 圖二、結核菌抗原定量标准曲线。利用台塑结核菌抗原酶免疫检验试剂中所提供的阳性对照品A、B、C、D进行測试，并將測得的OD读值与其相对浓度(20、10、5、1 ng/ml)做图，可获得定量标准曲线，利用此标准曲线即可换算检体中抗原浓度。 图三、台塑结核菌抗原酶免疫检验试剂稳定性测试。为确认试剂可长时间保存，将整组试剂放置于37℃，持续测试7天，将各测试品不同天所得之OD读值计算其变异系数，所有测试