乙型肝炎血清学诊断新进展.ppt

南方医科大学南方医院 侯金林 量 基因型/亚型 变异体 肝组织/血清浓度的比例 HBsAg定量检测：i2000的缺点 检测范围窄：0.05-250 IU/ml； 大部分样品需要稀释后测定 HBsAg定量检测的应用 一、了解影响血清HBsAg水平的因素 HBsAg与HBV DNA水平正相关 B基因型的HBsAg水平更高 独立影响血清HBsAg水平：HBV DNA 和基因型 基因型C: 肝内HBsAg水平更高 HBV/C: HBsAg转运障碍？ 基因型→HBsAg转运→临床结局？ HBsAg动态变化 研究目的 HBV 复制持续抑制时HBsAg的动态变化 HBsAg的动态变化 入选标准 HBeAg阳性 拉米夫定长期治疗，之前无抗HBV治疗； 病毒抑制快速：治疗24周HBV DNA阴性 病毒抑制持久：HBV DNA阴性持续至156周 基线资料 HBsAg动态变化特征与HBeAg转阴与否无关 基因型影响HBsAg的变化特点 个体患者HBsAg变化的主要类型 HBeAg定量检测 亚培公司曾经提供过HBeAg定量检测服务，但目前没有商品化的HBeAg定量试剂 HBV cccDNA HBV共价闭环(covalently closed circular, ccc)DNA是前基因组(pg)RNA合成的模板。是病毒复制的模板, 其数量决定病毒复制水平, 宿主免疫控制肝细胞的cccDNA数量, 肝内病毒复制和清除强度的平衡表现为血清病毒水平。 HBV cccDNA的定量 均依据松弛环状DNA和cccDNA在结构上的差异而设计，一些报告还采取酶消化的附加步骤以减少松弛环状DNA相对于cccDNA的比例以增加特异性 过高估计cccDNA水平, 有些方法甚至可以检测到血清中极高拷贝数的HBV cccDNA 不准确,不标准,不实用 HBV cccDNA的定量检测方法在特异性的提高上仍有空间； 同时采用目前的HBV cccDNA定量方法可能会对HBV生活周期的认识以及抗病毒治疗的策略制定产生误导，值得警惕 肝脏活检的不普遍性，HBV cccDNA定量的临床应用目前仍不现实。 HBV DNA 检测 血清HBV DNA定量 方法目前多以聚合酶链式反应（PCR）作为检测手段； HBV DNA定量的表达多以拷贝/毫升（copies/ml）或国际单位/毫升（IU/ml）表达，二者之间粗略的换算方法为1 IU/ml = 5 copies/ml。 血清HBV DNA定量检测的发展方向为更高敏感性（sensitivity）和更宽的动态范围（dynamic range）。 Minor fluctuation或minor rebound 例如罗氏公司的Cobas Taqman（敏感性为60IU/ml，动态范围可至108IU/ml)，目前刚完成或正在进行的临床试验多采用此方法，并将HBV DNA下降速率作为疗效的评价指标。 亚培公司的RealTime方法的检测范围与前者类似，检测下限可达10 IU/ml。 更早地监测到接受抗病毒治疗患者血清HBV DNA的波动甚至是反弹（minor fluctuation或minor rebound）， 不同试剂HBV DNA检测范围 High prevalence of genotype recombinations in China Prevalence of subgenotype C in China 闪海霞 谢谢各位！ cccDNA HBV mRNA 内质网 高尔基体 HBV 复制周期(Replication cycle of HBV) DNA 依赖聚合酶 RNA依赖聚合酶 胞核 肝细胞 HBsAg HBeAg HBV DNA 血 清 斑点杂交 （Dot-blot hybridization） 非PCR定量（Non-PCR based quantitative HBV DNA assays 定量 PCR-based quantitative HBV DNA assays 1980s 1990s 2000s 102 103 104 105 106 107 108 109 1010 Ultrasensitive Digene II Cobas Amplicor Versant HBV DNA 3.0 HBV DNA (copies/ml) Digene II bDNA NAXCOR Cobas TaqMan 国产试剂盲区 国产试剂盲区 (无天, 无地,无标,无法,) HBV 标准品 HBV DNA levels determined by different tests cannot be compared directly WHO standard – genoty