兽医微生物学实习.docVIP

实习报告 学 院: 动物医学院 课 程: 兽医微生物实习 班 级: 动物医学82班 学 号: 1718203 姓 名: 王广操 指导教师: 于勇 职称: 实验师 实习时间 2010年 6 月 7 日至 2010 年 6 月12 日 实习地点 逸夫楼微生物教学实验室4048 2010 年 6 月 13 日 南京农业大学教务处制 实习报告 一、目的要求 1 ．了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养特性； 2 ．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法； 3 ．掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理； 4 ．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生长表现； 二、实验材料 1.菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液，产气肠杆菌和变形杆菌混合液 2.培养基：半固体培养基 S·S平板 麦康凯平板 三糖铁高层斜面 蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 3.革兰式染色试剂：草酸铵结晶紫溶液、革兰氏碘溶液、95%酒精，沙黄水溶液 4. 生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸橼酸盐、H2S、尿素 5. 生化试剂：吲哚试剂， MR 、VP 试剂 三、实验内容及其安排 （一）、 配培养基：S.S、麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水。 （二）、 细菌分离培养：将大肠杆菌、沙门氏菌混合肉汤，产气、变形混合肉汤分别接种麦康凯、S·S平板，染色镜检 （三）、 挑取麦康凯和S·S平板上单一菌落做染色、镜检，挑单一菌落接种三糖铁斜面(涂布、穿刺) （四）、观察三糖铁中细菌生长情况。并挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种蛋胨水、葡胨水、半固体、微量生化管，37℃培养48h。 （五）、观察结果。 第一天、 配培养基（自由分组，5人/组） 第一组 S.S培养基：50g S·S培养基+800ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压 第二组 麦康凯培养基： 44g麦康凯培养基+800ml蒸馏水+1.6g琼脂粉，煮沸，高压15磅，15分钟，浇平板 第三组 三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化， 装长试管50根（10ml/管）， 高压15磅，15分钟，做高层斜面 第四组 葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高， 约5-8ml） 第五组 蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，121℃15分钟　（2指高，约2-4ml） 第六组 半固体：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤 称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml） 第二天、 分离培养 1.在麦康凯平板和S·S平板上接种待检材料（大、沙混合菌液;产气、变形混合菌液） 2.置37℃恒温培养箱内培养24小时 3.观察每种平板上细菌的生长情况 4.比较单个菌落的形态：染色镜检 SS琼脂 强选择性培养基 1.培养基中的煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠抑制非肠道 菌生长 2.不能发酵乳糖的细菌，菌落橘黄色 3.分解乳糖的细菌产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心混浊的深红色菌落 4.柠檬酸铁使产生硫化氢的菌落中心呈黑色 5.硫代硫酸具有缓和胆盐对细菌的有害作用及煌绿、中性红的毒性作用。 麦康凯培养基 1.用于肠道菌的分离与鉴定 2.能分解乳糖的细菌--菌落红色 3.不能分解乳糖的细菌—菌落灰白色 第三天 观察结果 接种三糖铁 1.观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况．可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起透明的菌落 实验结果： （1）SS琼脂 强选择性培养基：有橘黄色圆形凸起中心为黑色的菌落，橘黄色为变形杆菌，黑色为产气杆菌。 （2）麦康凯培养基：呈红色圆形凸起菌落和呈灰白色圆形凸起的菌落。其中红色菌落为 产气杆菌，灰白色菌落为变形杆菌。 （3）镜鉴结果