第十章基因定位与克隆.pptVIP

医 学 遗 传 学 基因定位与克隆 本章节重点 基因定位和基因克隆的概念 连锁分析 遗传标记 基因克隆的策略 基因定位(gene mapping)：利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上。 1911年，Wilson将红绿色盲基因定位到X染色体 1968年，Duffy血型基因定位于1号染色体 基因克隆(gene cloning)：用一定的方法把不同位点上的基因分离出来。 基因定位(gene mapping)：利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上。 连锁分析(linkage analysis)：利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。 连锁分析 连锁分析(linkage analysis)：利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。 连锁分析 连锁分析(linkage analysis)：利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。 连锁分析 重组值(recombination fraction)：是基因定位时两个基因间遗传图距的量度，即基因间的遗传距离。 厘摩(centimorgan，cM) 连锁分析(linkage analysis)：利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。 连锁分析 遗传标记 遗传标记(genetic marker)：基因定位是确定某一基因在染色体上的未知位置，用连锁分析法进行基因定位需要一些遗传位点，这些位点应按孟德尔方式遗传，且具有多态性以显示其连锁关系，这些标记位点称为遗传标记。 遗传标记 血型，血清蛋白 DNA RFLP DNA STR DNA VNTR 单核苷酸多态，SNP 连锁分析 EcoRⅠ EcoRⅠ EcoRⅠ 3.0 kb 1.7 kb 探针 Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 连锁分析 Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 3.0 kb 1.7 kb 4.7 kb 连锁分析 Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 4.7 kb 3.0 kb 连锁分析 1955, Morton: 优势对数法 (Lod) +3表示连锁存在 -2表示连锁不存在 多点连锁定位(multipoint linkage mapping) 利用三点交叉法(three point crosses)，可将某一致病基因定位于遗传标记的框架内，更精确的进行基因定位。 连锁分析 aBc/abc 95 B – X – (A，C) AbC/abc Abc/abc 47 A – X – (B，C) aBC/abc abC/abc 5 (A，B) - X - C ABc/abc abc/abc 853 非重组体 ABC/abc 数 目 重组位置 子代类型 多点连锁定位 体细胞杂交(somatic cell hybridization)又称细胞融合(cell fusion)，是将两个同种和/或不同种的细胞融合成一个新细胞，即杂种细胞(hybrid cell)。 病毒诱导的细胞融合——仙台病毒 化学融合技术——聚乙二醇(PEG) 电融合技术——电穿孔法 体细胞杂交 体细胞杂交 体细胞杂交 异核细胞 体细胞杂交 合核细胞 杂种细胞 两个同种的动物细胞融合后形成的杂种细胞，细胞核一般保留双亲的染色体；不同种动物的细胞融合后，细胞核含有双亲的的染色体，但随着增殖传代的过程，会出现保留一方染色体，另一方染色体逐渐丢失的现象。 体细胞杂交 HAT选择系统 1962, 人类HPRT- 1964, 小鼠TK- H：次黄嘌呤(hypoxanthine) A：氨基喋呤(Aminopt