DC-CIK细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用37.ppt

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RetroNectin activated killer cell(RAK) zoledronate acid/唑来膦酸 转染AFP质粒的腺病毒感染DC DC-CIK共培养 杀伤活性检测 健康供着DC和CIK 肝癌患者DC和CIK CIK/DC-CIK治疗后的不良反应 寒战 发热 疲乏 无力 关节肌肉酸痛 一般24小时内消失 小 结 体外实验证实DC-CIK肿瘤杀伤活性强,并具有肿瘤特异性; 被认为是新一代免疫治疗的首选方案,已经进入I、II期临床实验; 临床实验时间短,病例数尚不多; 治疗方案和标准尚待进一步规范和统一。 DC-CIK细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用 恶性肿瘤的治疗现状 恶性肿瘤 治愈45% 难于治愈55% 未缓解 缓解后复发 恶性肿瘤的多学科综合治疗 恶性肿瘤各种治疗手段各具优势与不足 肿瘤外科学 肿瘤放射治疗学 肿瘤化学治疗学 肿瘤生物学治疗 侧重点不同 局部与全身 早、中、晚期 肿瘤免疫学治疗的优点 可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞,达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根治肿瘤的目的。 具有特异性强、适用性广、副作用轻等优点。 肿瘤免疫学治疗 非特异免疫刺激剂及细胞因子治疗: IL2、IL6、IL12、GM-CSF、TNFa、IFNa、IFNr等体内应用,装载有细胞因子基因的细胞治疗。 治疗性疫苗:肿瘤抗原或多肽抗原疫苗、装载肿瘤抗原基因的病毒疫苗、基因修饰的肿瘤细胞疫苗、APC细胞疫苗、抗独特性疫苗。 Mab导向治疗: Mab、Mab-毒素、Mab-同位素、鼠-人单抗、人源单抗、双特异性抗体。 过继性免疫细胞治疗:供者淋巴细胞输注、LAK、TIL、CIK、多种方法诱导的CTL、DC-CIK等。 过继免疫疗法 通过把在体外扩增的大量特异性效应细胞回输给患者后,产生直接杀伤肿瘤细胞的作用。 DC-CIK培养及其应用 CIK细胞:Cytokine Induced Killer Cell DC:Dendritic Cell CIK细胞特性 分布:肝脏和外周血 来源:CD3+CD56+T细胞和CD4-CD8+T细胞 一群以CD3+CD56+T为主的异质细胞包括α/βT细胞,γ/δT细胞 与LAK、CD3AK细胞相比高效、广谱杀伤、非MHC限制 DC与T细胞 DC高表达MHC-Ⅰ类、Ⅱ类分子,MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合,形成肽-MHC分子复合物,递呈给T细胞,从而启动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限制性的CD4+ Thl反应 ; DC还通过其高表达的共刺激分子(B7-1、B7-2等)提供T细胞活化所必须的第二信号,启动了免疫应答。 DC负载肿瘤抗原 肿瘤杀伤作用 DC在DC-CIK杀伤肿瘤细胞中的作用 诱导抗原特异性CTL反应 增加CIK细胞的扩增倍数 增强CIK肿瘤杀伤效力 MHC:抗原提呈 自分泌细胞因子:INF,IL-12等 抑制CD4+CD25+调节T细胞生长 CIK细胞的制备 PBMNC (CS3000 Plus) In a 3000ml Baxter bag Serum free culture medium IFNγ 第一天 Il-2 第二天 CD3 mAb 第二天 IL 1α 第二天 14 days CS-3000采集PBMNC Ficoll分离PBMC,洗2次 1-2×106/ml接种至含无血清培养基的培养袋中,1000ml/袋,加入IFN-γ1000U/ml,放置37℃,5%的CO2孵箱中培养24h 加入IL-1α 100U/L,CD3单抗50ng/ml,重组人IL-2 300U/L,继续培养,每3天半量换液,并补加IL-2 300U/ml。 分别于第5,7,9天取细胞做细胞表型分析(FCM检测),细胞杀伤实验(MTT法) 收集细胞,含0.5%白蛋白的生理盐水洗涤 回输 CD3主要促CIK细胞增殖,促IL-2自分泌,也提高CIK杀伤活性 IFN-r/IL-1,上调细胞表面IL-2R表达,IFN-r先于IL-2加入,有效激活效应细胞,增强抗肿瘤活性 DC的培养 BMDC Serum free culture medium IL-4, GM-CSF TNFα 成熟DC 7~9 days IL-4 , GM-CSF TNFα PBDC Tumor antigen DC-CIK共培养 成熟DC CIK细胞 + CIK细胞的增殖 62.% 84.7% 89.5% 28.2% 43.1% 52.3% CIK细胞对自体原代白血病细胞的 杀伤作用 CIK细胞对自体原代白血病细胞有明显杀伤作用,且其细胞毒作用随着效靶比的增加而进一步增强,在效靶比为2

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