亚麻耐盐碱ISSR标记的引物筛选及反应体系的建立.docVIP

  亚麻耐盐碱 ISSR 标记的引物筛选及反应 体系的建立# 赵东升，吴建忠，黄文功，康庆华，刘岩，姜卫东，宋喜霞，程莉莉，于莹， 5 10 15 20 25 30 35 吴广文，关凤芝** （黑龙江省农业科学院经济作物研究所，哈尔滨 150086） 摘要：本研究对亚麻 ISSR 反应条件进行了优化，并利用 100 个随机引物，以亚麻耐盐碱材 料 7000ha-1 和不耐盐碱材料 05-10 为模板进行 ISSR 标记筛选。经过三轮的筛选，结果只 有 33 条引物能在亲本间扩增出稳定的多态性，占整个扩增引物的 33%，为下一步 ISSR 标记 应用于作图群体分析奠定基础。 关键词：亚麻；耐盐碱；ISSR 标记 中图分类号：S3 SCREENING ISSR PRIMERS AND ESTABLISHING REACTION SYSTEM IN ALKALI AND SALT TOLERANCE ON FLAX ZHAO Dongsheng, WU Jianzhong, HUANG Wengong, KANG Qinghua, LIU Yan, JIANG Weidong, SONG Xixia, CHENG Lili, YU Ying, WU Guangwen, GUAN Fengzhi (Industrial Crops Institute of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150086) Abstract: The ISSR reaction condition are optimized in this study, ISSR marker screening between the material of alkali and salt tolerance (7000 ha-1) and the opposite material (05-10) for template in 100 random primers. After three rounds of selection, only 33 primers show a stable polymorphism between parents, accounting for 33% of the whole primers amplification, it lay the foundation for the next step in mapping application mark ISSR group analysis. Keywords: Flax; Alkali and salt tolerance; ISSR mark 0 引言 ISSR(inter-simple sequence repeat)标记技术是在 SSR 基础上发展起来的一项新的标记技 术，由于其引物设计比 SSR 简单，不需要知道 SSR 两端的碱基序列，多态性高，重复性好， 能够提供更多的信息，已在多种动植物的种质鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性等研 究方面得到应用。本研究通过对亚麻 ISSR 反应体系的优化，确定了亚麻 ISSR 标记体系， 并进行亚麻耐盐碱标记引物的筛选，验证了 ISSR 标记在亚麻体系的稳定应用，为下一步 ISSR 标记应用于作图群体分析奠定基础。 1 材料与方法  1.1 1.1.1  材料 植物材料 亚麻耐盐碱材料 7000ha-1 和不耐盐碱材料 05-10，均由黑龙江省农业科学院经济作物研 基金项目：哈尔滨市科技攻关计划项目基金（2009RFQYN087） 作者简介：赵东升，（1976- ），男，助理研究员，主要研究亚麻栽培育种方向。 通信联系人：吴建忠，（1983- ），男，研究实习员，主要从事亚麻生物技术育种. E-mail: wujianzhong176@163.com -1- 究所提供[1]。   40  1.1.2  试剂 dNTPs、TaqDNA 聚合酶、10×PCR Buffer、MgCl2 购自北京天根生化科技有限公司； 琼脂糖、Tris、CTAB 均购自 Sigma 公司。  1.1.3  ISSR 引物 本实验所用的 100 条引物参照加拿大哥伦比亚大学（UBC）设计并公布的序列，由上海 45 生物工程公司合成。  1.2 1.2.1  方法 DNA 提取与浓度检测 取亚麻幼苗上部新长出的无病叶片 0.3g，采用改良的 CTAB 法提取亚麻基因组 DNA[2] ， DNA 浓度在紫外分光光度计中检测。  50  1.2.2  ISSR 反应体系的建立 ISSR 反应在美国 ABI 公司生产的 2720