技术人员培训课件：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).pptVIP

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS－PAGE） 原理：蛋白质或多肽与SDS结合，经热变性和二 硫键的还原，形成所带负电荷相对一致的非折叠 衍生物，其泳动速度主要由分子量决定。 凝胶的制备： 凝胶由分离胶和浓缩胶组成： 上层为浓缩胶，凝胶孔径较大，没有分子筛效应， 其pH为6.8，由于快慢离子所形成的高电压梯度， 使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层， 大大提高了分辨率。 下层为分离胶，凝胶孔径较小，有分子筛效应，pH 为8.8，变性蛋白质分子所带负电荷基本一致，泳动 速度主要决定于分子量。 制备顺序为先灌制分离胶，然后在分离胶上灌制 浓缩胶： （四人一组） 1. 在两块玻璃板间夹以垫条，用手夹住玻璃板放入电泳槽主体内，缺口朝外，再插入斜楔板。 2. 拿一小烧杯，按下表加入各试剂： （12％分离胶） 单体溶液 4ml 分离胶缓冲液（pH8.8） 2.5ml 超纯水 3.3ml 10％SDS 100ul 10％TEMED 30ul 10%过硫酸铵 70ul 3. 上述溶液混匀后，用滴