蛋白质的定量测定方法.pptxVIP

实验 蛋白质的定量测定方法;一、Folin酚试剂法(Lowry法);【实验原理】;1.实验器材 100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度计。 2.实验试剂 (1)Fo1in酚试剂甲：将lg碳酸钠溶于50mL0.lmol／L氢氧化钠溶液中，再把0.5g硫酸铜(CuSO4?5H2O)溶于100mL1％酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，然后将前者50mL与后者lmL混合。混合后1日内使用有效。 (2)Folin酚试剂乙：在1.5L容积的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na2WO4?2H2O)、25g钼酸钠(Na2MoO4?2H2O)、700mL蒸馏水、50mL85％磷酸及100mL浓盐酸，充分混匀后回流10h。回流完毕，再加150g硫酸锂、50mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴，冷却后定容到1000mL。过滤，如显绿色，可加溴水数滴使氧化至溶液呈淡黄色。置于棕色瓶中暗处保存。;【实验材料】;【实验操作】 1. 绘制标准曲线 取7支试管，按下表分别加入各试剂 ;二、紫外吸收法 【实验目的】 1. 学习紫外吸收法测定蛋白质含量的原理。 2. 掌握紫外分光光度计的操作方法。 【实验原理】 大多数蛋白质分子结构中含有芳香族氨基酸（酪氨酸和色氨酸）残基，使蛋白质在280nm的紫外光区产生最大吸收，并且这一波长范围内的吸收值与