湖南蓝山二中高二生物课件：1.2 基因工程的基本操作程序（人教选修3）.pptVIP

2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功表达 （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤) ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 归纳步骤 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 （二）、鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 P15思考与探究 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原抗体杂交 * 1.2 基因工程的基本操作程序 教学重点： 基因工程基本操作程序的四个步骤 教学难点： 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 教学目标： 简述基因工程原理及基本操作程序； 尝试设计某一转基因生物的研制过程 课时安排：共3课时 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 步骤一：目的基因的获取 目的基因的提取方法: 直接分离基因 人工合成基因 鸟枪法 从基因文库中获取 cDNA文库 反转录法合成DNA 根据已知的氨基酸序列合成DNA 基因组文库 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 例如：抗虫基因，荧光蛋白基因等 1. 鸟枪法（散弹射击法） 用限制酶将供体细胞中 的DNA切成许多片段， 从中找出含有目的基因。 多用于原核生物。 2.人工合成基因法（多用于真核生物） ①反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成 互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链 DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的 mRNA 单链DNA (cDNA) 反转录 2.人工合成基因法（多用于真核生物） ②根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的 信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则， 推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化 学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 结构基因的 核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 蛋白质的 氨基酸序列 结构基因的 核苷酸序列 mRNA的 核苷酸序列 目的基因 步骤一：目的基因的获取 根据已知氨基酸 合成DNA法 反转录法 鸟枪法 缺点 优点 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 操作简便 广泛使用 专一性强 专一性最强 工作量大，盲目，分 离出来的有时并非一 个基因 操作过程麻烦， mRNA很不稳定， 要求的技术条件较高 仅限于合成核苷酸对 较少的简单基因 3.从基因文库中获取目的基因： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导 入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有 这种生物的不同的基因，称为基因文库(gene library) 基因文库中包含了一种生物所有的基因，这种 基因文库叫做基因组文库。 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 补充：基因文库的构建 （1）直接分离法 3.从基因文库中获取目的基因： 基因文库中