现代分析测试技术复习题.docVIP

一、问答题： 1、试述塔板理论的基本关系式及理论要点。色谱概论 2、塔板理论的假设： 1）色谱柱内存在许多塔板，组分在塔板间隔（即塔板高度）内可以很快达到分配平衡。 2）流动相进入色谱柱，不是连续的而是脉动式的，即每次通过为一个塔板体积。 3）样品加在每个塔板上，样品沿色谱柱轴方向的扩散可以忽略。 4）在所有塔板上分配系数相等，与组分的量无关。即分配系数在各塔坂上是常数。 在tR一定时，W或W1/2越小(即峰越窄)，理论板数n越大， 理论板高越小，柱的分离效率越高。有效理论塔板neff也同此理。因此，理论塔板数是评价柱效能的指标。 2、利用范氏方程说明HPLC中如何选择实验条件？ 应用范氏方程选择HPLC的分离条件 ① 采用粒径小而均匀的球形固定相，首选化学键合相，用匀浆法装柱。 ② 采用低黏度流动相，低流量(1mL/min)，首选甲醇。 ③ 采用柱温箱，避免室温波动，增加实验重复性，柱温以25～30℃为宜。 3、高效液相色谱仪包括哪些主要部件？各部件的作用是什么？ 高效液相色谱仪由五大部分组成：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和色谱工作站。 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。高压输液系统由储液罐、过滤器、高压输液泵、梯度洗脱装置等组成。 1、储液罐 用来储存足够数量、符合要求的流动相。 注意：流动相在进入高压泵之前，应先进行过滤和脱气处理。 溶剂前处理——过滤 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 溶剂前处理——脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 、高压输液泵 有恒流泵和恒压泵两种。 高压输液泵是核心部件，要求：密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等。 由于色谱柱很细，填充剂粒度小，因此阻力很大，为达到快速、高效分离，必须有很高的柱前压力，以获得高速的液流。 等度洗脱：是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。 3、等度与梯度洗脱装置 液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。 梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 梯度洗脱特点： 提高柱效 改善检测器的灵敏度 进样系统是将被分离的样品导入色谱柱的装置。要求密封性、重复性好，死体积小，便于实现自动化。 进样系统包括取样、进样两个功能，而实现这两个功能又分为手动和自动两种方式： 自动进样器是由计算机自动控制定量阀，按预先编制注射样品的操作程序工作。取样、进样、复位、样品管路清洗等步骤全部按预先设定程序自动进行，一次可进行几十个或上百个样品的分析。 自动进样的样品量可连续调节，进样重复性高，适合作大量样品分析，节省人力，可实现自动化操作。 （三）分离系统 色谱柱： 色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件，要求分离度要高、柱容量大、分析速度快。分离系统的主要元件是色谱柱，它是色谱分离过程中存放固定相的场所。 检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。并由工作站（或记录仪）绘出谱图来进行定性、定量分析。 HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低（即对温度、流量等外界变化不敏感）、线性范围宽、重复性好和适用范围广。 （五）馏分收集器 如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了获得少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的。使用馏分收集器比较理想，因为便于用微处理机控制，按预先规定好的程序，或按时间，或按色谱峰起落信号逐一收集和重复多次收集。 （六）色谱数据工作站 目前市场上销售的高效液相色谱仪基本上都用微机控制，配备了色谱数据工作站。色谱仪的自动化控制包括自动进样系统的进样方式、输液泵系统中的溶剂流速、梯度洗脱程序、检测系统的各项参数、数据记录和处理等。 4、什么是锐线光源？为什么空心阴极灯发射线是锐线？ 锐线光源是发射线半宽度远小于吸收线半宽度的光源。锐线光源发射线半宽度很小，并且发射线与吸收线中心频率一致。 （1）灯工作电流较小1-20 mA，灯内温度低，故Doppler变宽小； （2）灯内充低压气体，压力低，故压力变宽小 5、紫外-可见分光光度计主要有哪几种类型？各类型有何特点？ 紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为四种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计、双波长分光光度计和二极管阵列分光光度计。 1、单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简易型分