利用反向遗传技术对H_3N_2 亚型流感病毒NA 基因突变的研究.pdfVIP

第21卷 第 3期 吉林农业科技学院学报 v01．2l，N0．3 2012年9月 JournalofJilinAgriculturalScienceandTechnologyUniversitySeptember．2012 利用反向遗传技术对 H3N2 亚型流感病毒NA基因突变的研究 韩冰孝，董长颖 (吉林农业科技学院生物-1-程学院，吉林 132101) 摘 要：为了拯救 出usN2亚型流感病毒的重组新病毒，利用反向遗传学手段，8个质粒共同转染293T细胞，包装带有 双点突变(第 119位氨基酸由E突变为v，第222位氨基酸由I突变成L)、单点突变和野生型的流感病毒 N2；在MDCK细 胞中传代包装成的H3N2病毒。结果表明，野生流感病毒 H3N2和其突变株包装成功，第 119位氨基酸单点突变型滴度与野 生型的相近 ，而第222位氨基酸单点突变和双突变型滴度要比野生型的低。本实验成功证明了H3N2神经氨酸酶上两个位 点(第 119和222位氨基酸)对病毒包装及复制起到关键的作用，且NA上第222位氨基酸相对于第 119位氨基酸显得要更 重要 。 关键词i流感病毒H3N2；神经氨酸酶NA；反向遗传学 中图分类号：$852 文献标识码：A UseofReverseGeneticsTechnologyResponsibleforH3N2Influenza VirusNA GeneMutations HAN Bingxiao，DONGChanffcing (腑 l4g如幽嘲zSdenceandTechnoo／gyUnv／ers／ty SchoolofBioengineering，JUin132101) Abstract：Inordertoi~tvethereorganizationofanewvirusofthensN2influenzavirus，H3N2wildtypeand htreemutationtype(E119D+I222L，E119DandI222L)virusesweregeneratedbyl~versegenetics；Thel~versege- neticsviurses stableafterfiveI)a~ tgesinMDCK cells．Successfullygeneratde H3N2wildtypenadmuattion typeviruses；Th ewildtypehadasimilarvirustiterwiht htemutationtypeEllgD；Th evirustiterofE119D+I222L nadI222Ltypew_e lowerthna thewildtype．Theseresultsindicatedhtatdoublemutation(E119D+I222L)type H3N_2couldindue~ahishlevelofoseltamivirresistance．NA andhtefirst222fl／ninoacidsocmparedto119amino acids9eI那 tobenlore important． Keywords：influenzavirusnsN2；NeuraminidaseNA；reversegenetics 甲型流感病毒表面主要有两个糖蛋白：红细 目前，有临床研究表明某些突变型甲型流感 胞凝集素 (hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶 (nel1． 病毒H3N2具有抗奥司他韦的能力，发现其 NA上 raminidase，NA)。HA通过结合细胞膜上的唾液酸 的两个关键的氨基酸位点 (第 119和222位氨基 受体从而介导病毒内吞进入细胞…1。NA通过切 酸)对病毒的