组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合吉西他滨对骨肉瘤MG-63 细胞抑制作用的研究.docVIP

520 基础研究·Basic Research  　　肿瘤 2013 年 6 月第 33 卷第 6 期　TUMOR Vol. 33, June 2013 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2013.06. 007 Copyright? 2013 by TUMOR  组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合吉西他滨对骨肉瘤MG-63细胞抑制作 用的研究 胡旭昌，王栓科，康学文，汪　静，安丽萍，夏亚一，狄天宁，马靖琳，王翠芳，胡杰亮 兰州大学第二医院骨科，甘肃省骨关节疾病研究重点实验室，甘肃 兰州　730030 [ 摘要 ]　目的：研究组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂 MGCD0103 和吉西他滨（gemcitabine） 单药或联合作用对体外培养的人骨肉瘤细胞株 MG-63 生长的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：体外传代 培养人骨肉瘤 MG-63 细胞，将不同浓度的 MGCD0103（1、10 和 100 μmol/L）和吉西他滨（0.1、0.2 和 0.4 mg/L）分别单独或联合作用于 MG-63 细胞；采用 MTT 法检测 2 种药物单药或联合作用对 MG-63 细胞的生 长抑制作用，并观察其有效的作用浓度；在荧光显微镜下观察细胞的凋亡情况；实时荧光定量 -PCR（real-time fluorogenic quantitative-PCR，RFQ-PCR） 检 测 MG-63 细 胞 中 转 移 相 关 基 因 1（metastasis-associated gene 1， MTA1）mRNA 表 达 的 变 化， 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 p21、Bax 及 血 管 内 皮 生 长 因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达水平的变化。 结 果：MGCD0103 和吉西他滨单药或联合作用都能明显抑制 MG-63 细胞 的生长（P ＜ 0.05），并呈剂量依赖性，MGCD0103 和吉西他滨具有协同作用。荧光显微镜下观察结果显示， MGCD0103 和吉西他滨单药或联合作用于 MG-63 细胞后，大量具有凋亡形态特征的细胞出现，凋亡细胞数明 显增多；RFQ-PCR 和蛋白质印迹法检测结果分别显示，MTA1 mRNA 及 VEGF 蛋白的表达量明显下调，而 p21 和 Bax 蛋白的表达量明显上调。结论：MGCD0103 和吉西他滨通过诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖而发挥体 外抗骨肉瘤作用，其作用机制涉及细胞周期和凋亡相关基因表达的调控。MGCD0103 和吉西他滨具有协同作用， 有望成为治疗骨肉瘤治疗的一种新手段。 [ 关键词 ]　骨肉瘤；组蛋白脱乙酰化酶类；吉西他滨；抗肿瘤联合化疗方案；MG-63 细胞 [文献标志码] Experimental study of MGCD0103 in combination with gemcitabine inhibiting the growth of human osteosarcoma MG-63 cells in vitro HU Xu-chang, WANG Shuan-ke, KANG Xue-wen, WANG Jing, AN Li-ping, XIA Ya-yi, DI Tian-ning, MA Jing-lin, WANG Cui-fang, HU Jie-liang Department of Orthopaedics, Orthopaedic Key Laboratory of Gansu Province, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, Gansu Province, China [ABSTRACT]　Objective:To investigate the inhibitory effect of HDAC (histone deacetylase) inhibitor MGCD0103 and gemcitabine on the proliferation of human osteosarcoma MG-63 cells in vitro, and to explore its possible mechanism. Methods:The cell proliferation inhibitory rates of MG-63 cells treated with different concentrations of MGCD0103 (1, 10 and 100 μmol/L) or gemcitabine (0.1, 0.2 and