逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究.pdfVIP

1 中国农业科学 2010,43(15):3266-3270 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.15.027 逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究 1，2 1 2 张秋婷 ，苗向阳 ，安铁洙 1 2 （中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193 ； 东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040 ） 摘要：【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增 强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe 中获得重组逆转录表达载体； 采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG 共转入293 10A1包装细胞中进行病毒包装，得到病毒原液经超速离心浓 缩200倍后注入种蛋（第X期）胚盘下腔，孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA，进行PCR检测和Southern 杂交检测。【结果】构建含 EGFP 完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体 pour-pBabe-EGFP，提取孵化 5.5 d 鸡胚 基因组 DNA，经 PCR、Southern 杂交检测，嵌合体阳性率分别为 75%和 66.7%。【结论】通过用重组逆转录病毒体 内感染鸡胚盘细胞的方法可获得嵌合体鸡。 关键词：逆转录病毒；增强型绿色荧光蛋白；胚盘细胞；嵌合体；鸡 Studies on Production of Chimeraic Chicken Embryos via Transfected Blastoderm Cells 1,2 1 2 ZHANG Qiu-ting , MIAO Xiang-yang , AN Tie-zhu 1 2 ( Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193; The Institute of Life Sciences, Northeast Forestry University, Harbin 150040) Abstract: 【Objective 】 Chicken chimeras were produced using chicken stage X blastoderm cells, which were infected by recombinant retrovirus in vivo. 【Method 】 The recombinant expression vector pour-pBabe-EGFP was established by connecting expression vector and EGFP gene. The recombinant vector and packaging vector pVSVG were tra