丙型肝炎病毒核心抗原检测技术国内外临床研究应用情况.docVIP

丙型肝炎病毒核心抗原检测技术国内外临床研究应用情况 （综述） 张贺秋 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）感染引起的一种重要的世界性传染病。 一般地，15~20%左右的HCV感染者为自限性感染，可以很快的康复。但是，也有80~85%的感染者发展为慢性丙型肝炎，其中又有20%的可发展为肝纤维化，最终有4~5%的肝纤维化患者发生肝细胞性肝癌，危害十分严重。 目前，慢性丙型肝炎除了干扰素有确切的疗效外，尚无其它有效的治疗药物。国际上近来报道，PEG修饰的干扰素加利巴韦林联合治疗可在40~50%左右的患者获得较好的反应，但也有疗程长、价格昂贵、毒副作用大以及易反弹等缺点。此外，丙型肝炎疫苗的研制也因HCV高度变异而困难重重，短期内难有突破性进展。因此，尽早检出HCV感染者，阻断HCV的传播是当务之急。 1 HCV检测技术的现状 HCV一般通过被HCV污染的血液和血液制品传播，现在常用的HCV检测技术有两种方式：（1）间接检测，主要检测抗HCV抗体；（2）直接检测，通过定性或定量检测HCV病毒粒子的组成成分确定病毒的存在，例如HCV RNA。这两种检测方式在确诊HCV感染，选择HCV感染者的治疗方案以及评价抗HCV治疗的疗效方面起到了关键作用。 1.1 抗HCV抗体的检测 上世纪九十年代初，利用重组HCV抗原开发出了抗HCV抗体检测技术，即酶免疫分析（enzyme immunoassays, EIAs）技术，已经发展到第三代。该技术可检测样本中针对不同HCV抗原（如C区、NS3区、NS4区和NS5区等）的混合抗体，目前检测的特异性已高达99%以上。 由于缺乏更敏感的金标准，抗HCV EIA技术的敏感性还很难确定。在免疫健全的患者中，抗HCV EIA的检测敏感性高于99%，几乎所有的HCV感染者都可以被检测出来。但对于正进行血液透析的患者和严重免疫缺损患者，虽然其体内有HCV复制活跃，但EIA检测可能就是阴性结果。为此，某些厂商又开发了免疫条带分析作为确证实验，如Ortho公司开发的RIBA等。因第三代EIA在临床检测中表现良好，目前免疫条带分析在临床的实际应用的意义已不是很大。但因为在血站EIA检测结果阳性的阳性预测值（positive predictive value, PPV）相对较低，其在血站仍然有很大的用武之地。 1.2 HCV RNA的检测 1.2.1 定性检测HCV RNA 定性检测中HCV RNA的存在被视为HCV病毒复制的标志。因其敏感性比现有的任何一种定量检测方法都要高，定性检测HCV RNA是非常有用的一种直接检测HCV是否存在的技术。该技术基于利用RT-PCR技术或转录介导的扩增（transcription-mediated amplification, TMA）技术特异性扩增HCV基因组RNA序列，又称为核酸扩增（nucleic acid amplification techniques, NAT）技术。目前市面上的HCV RNA定性检测试剂的检测临界值为50 HCV RNA IU/mL和10 IU/mL，主要产品有Roche公司的Cobas Amplicor? or Amplicorò HCV Test, Version 2.0；Chiron公司基于TMA技术的Procleixa HIV-1/HCV，可一个反应同时检测HIV-1 RNA和HCV RNA。 1.2.2 定量检测HCV RNA 样本中HCV RNA含量可通过NAT技术和信号扩增技术（分支DNA检测）来确定。目前市面上的HCV RNA定量检测试剂的最低检测临界值介于30 IU/mL和615 IU/mL之间，线性定量的上限在500, 000 IU/mL和7, 700, 000 IU/mL之间。样本中病毒水平高于检测上限的，应稀释1/10或1/100后重新检测。HCV RNA定量检测结果不受HCV基因型的影响，而所谓的国际单位（international unit, IU）是按WHO HCV RNA标准参比血清来确定的。为了比较不同HCV RNA定量检测试剂的检测结果和在全球推广，在不久的将来所有的HCV RNA定量检测试剂都应该采用此标准。目前市面上的HCV RNA定量检测试剂主要产品有基于分支DNA技术的Bayer公司Versant? HCV RNA 3.0；基于竞争性PCR技术的Roche公司Cobas Amplicor? or Amplicorò HCV Monitor Test, Version 2.0和Abbott公司LCx HCV RNA Quantitative Assay。 2 现有常用检测技术的局限性 2.1 抗HCV EIA检测存在“窗口期” 由于现有的第三代抗HCV EIA检