荧光相关光谱及其在单分子检测中的应用进展.pdfVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　评述与进展 第 6期 　　　　　 　　　　　　 　　　　　　　　 　　　 2005年 6月 Ch inese Jou rnal of A nalytical Chem istry 875～880 评述与进展 荧光相关光谱及其在单分子检测中的应用进展 张普敦 　任吉存 (上海交通大学化学化工学院 ,环境科学与工程学院 ,上海 200240) 摘 　要 　单分子检测在生命科学 、化学 、物理学等领域具有重要的意义 。荧光相关光谱是单分子检测的新技 术 ,在生命科学领域有巨大的应用潜力 。综述了荧光相关光谱单分子检测的原理 、实验技术以及在生物分子 相互作用 、活细胞 、核酸 、疾病诊断、高通量筛选以及与毛细管电泳联用等领域的研究 ,并展望了其发展前景 。 关键词 　单分子检测 ,荧光相关光谱 ,评述 1　引　　言 生命科学的发展对分析检测技术的灵敏度要求越来越高 ,人们希望在单分子水平上了解物质之间 ( ) 的相互作用以及生命的过程 。激光诱导荧光 L IF 是 目前最灵敏的检测方法 , 可用于单分子的研究 。 ( ) 影响激光诱导荧光检测灵敏度的主要因素来自瑞利和拉曼散射 。荧光相关光谱 FCS 利用激光共焦技 术减少样品照射体积 ,抑制散射光影响从而实现单分子检测的新方法 。该方法是通过测定溶液中微区 ( - 15 ) ( ) 内 通常 10 L 发光粒子由于布朗运动或化学反应而产生的荧光涨落现象 荧光强度的明暗变化 , 并对荧光强度随时间变化函数作分析 ,从而获得粒子的浓度 、化学动力学参数等相关信息 。虽然荧光相 关光谱概念在上世纪 70年代提出[ 1～3 ] ,但直到 90年代随着计算机技术 、激光共焦技术以及光学检测技 术的发展才使其得到实质性进展 ,实现了单分子检测 。荧光相关光谱单分子检测技术在生物学和化学 领域有广泛的用途 。除了进行扩散常数 、化学动力学参数等研究外 , FCS技术现已应用于生物分子相互 作用研究、活细胞分析 、核酸分析 、肿瘤早期诊断以及高通量药物筛选等 。本文对近年来荧光相关光谱 单分子检测技术的研究进展 ,特别是在生命科学领域的研究进展进行评述并展望了其发展前景 。 2　工作原理 [ 2 , 4 ～7 ] 某一物质的荧光强度与其浓度成正比。同样 ,在开放微区内平衡时记录的荧光信号强度也与其中 ( ) 的荧光分子数成正比。由于荧光分子的扩散 或由于化学反应 导致进入或离开微区的分子数 目总是 ( ) ( ) 在其平衡值处发生变化 ,因而导致荧光信号强度 F t 也不断变化 即产生荧光的涨落现象 ,它是时间 的函数 。微区内荧光分子数在任一时间 t的变化导致荧光强度的涨落值为 : δ ( ) ( ) ( ) ( )