棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及特征分析.pdfVIP

11 1 中国农业科学 2010,43(6):1117-1126 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.003 棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及特征分析 倪志勇，吕 萌，李 波，王 娟，白 岩，范 玲 （新疆农业科学院核技术生物技术研究所，乌鲁木齐 830091 ） 摘要：【目的】克隆棉花木质素合成关键酶基因GhCOMT1、GhCOMT2 和 GhCOMT3 全长 cDNA 序列，分析其在不 同组织部位的表达情况并进行原核表达研究。【方法】根据棉花纤维特异表达 cDNA 文库分析得到的 EST 序列设计 引物，采用 RT-PCR 技术克隆基因，用生物信息学方法对获得的 cDNA 序列及推定的氨基酸序列进行分析。采用半 定量 RT-PCR 方法研究 GhCOMT1、GhCOMT2 和 GhCOMT3 在不同组织中的表达。构建了基因的原核表达载体，经酶切 鉴定后转化到大肠杆菌 BL21（DE3）中并诱导表达。【结果】从发育的棉花纤维中克隆了 3 个 COMT 基因 cDNAs， GhCOMT1 （GenBank登录号为FJ479708）、GhCOMT2 （GenBank登录号为FJ479709）和GhCOMT3 （GenBank 登录号为 FJ848869）分别具有1 101 bp、1 098 bp、1 071 bp的开放阅读框，各自编码366、365和 356个氨基酸。GhCOMT1、 GhCOMT2 和 GhCOMT3 在棉花各个组织中都有表达，GhCOMT1 和 GhCOMT2 在根部的表达量最高，GhCOMT3 在茎中表达 量最高。SDS电泳分析表明，3个蛋白的最佳诱导表达条件均为0.2 mmol·L-1 IPTG在37℃下诱导6 h。【结论】 从棉花中克隆了3个木质素合成关键酶基因 GhCOMT1、GhCOMT2 和 GhCOMT3，为进一步的生物学功能研究及其应用 奠定了基础。 关键词：棉花；咖啡酸-O-甲基转移酶基因；基因克隆；表达分析；原核表达 Cloning and Characterization of COMT Genes from Gossypium hirsuturm L. NI Zhi-yong, LÜ Meng, LI Bo, WANG Juan, BAI Yan, FAN Ling (Institute of Nuclear and Biological Technologies, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Urumqi 830091) Abstract: 【Objective 】 In this study, full-length cDNA of a key enzyme genes GhCOMT1, GhCOMT2 and GhCOMT3 related to lignin metabolism in cotton (Gossypium hirsuturm L.) were isolated. Analysis of the expression of GhCOMT1, GhCOMT2 and GhCOMT3 genes in different tissues of cotton was carried out and the genes were also expressed in the prokaryote. 【Method 】 According to the results of cotton fibre preferentially expressed cDNA library analysis, the primers of EST sequ