区段 区段动力学毛细管电泳测定动力学参数的新 方法及其应用.pdfVIP

中国科学 B 辑 :化学 2008 年 第 38 卷 第 8 期 : 705 ~ 709 SCIENCE IN CHINA PRESS 区段- 区段动力学毛细管电泳测定动力学参数的新 方法及其应用 ① ①②* ② ① ① 熊彩侨 , 夏之宁 , 黄锐 , 陈华 , 徐盼 ① 重庆大学化学化工学院药学系, 重庆 400044; ② 重庆大学生物工程学院, 重庆 400044 * 联系人, E-mail: chem_lab_cqu@ 收稿日期: 2008-01-31; 接受日期: 2008-02-25 国家自然科学基金项目(批准号:资助 摘要 建立了一种可同时测定kon 和koff 这两个动力学参数的区段- 区段动力学毛细 关键词 管电泳(ppKCE)新方法, 以测定西酞普兰与BSA 的亲和相互作用体系的动力学参数 相互作用 kon, koff 及结合常数Kb 值进行了方法的具体应用, 采用时间比的方法对所测得的结果 毛细管电泳 进行了验证. 该方法操作更为简便, 可有效避免常规 ppKCE 存在的限制, 并降低了 动力学参数 ppKCE 对毛细管电泳分离度及检测灵敏度的要求, 拓展了动力学毛细管电泳的应用领域. 1 引言 准确的测定结合参数, 另外, 固定受体或配体的程序 药物与蛋白的非共价相互作用包括药物与蛋白 费时且昂贵, 这些也都限制了这种方法的发展和应 的结合及离解两个可逆的动力学过程. 在血浆中, 由 用. 动力学毛细管电泳是一个测定动力学参数的强 于与蛋白结合的药物难于通过毛细血管壁, 只有游 大工具, 可同时测定kon 和koff, 其中两种物质的相互 离的药物才可到达靶器官, 发挥药效及药理活性, 因 作用发生在均相溶液并且这种相互作用是动态的. 此药物与血浆蛋白相互作用的动力学过程在药代动 ppKCE[4,5]是动力学毛细管电泳种一种能直接测 力学、药效学中都起着重要的作用, 结合程度的定量 定kon和koff 的模式. 在这种方法中, 假设A物质的迁移 研究对于药代动力学研究更是必需的[1~3]. 速度比B快, 则一小区段B物质首先被注入毛细管中, 药物与蛋白的定量结合参数Kb 由结合速率常数 然后注入一小区段A物质; 当施加电压时, A物质穿过 k 和离解速率常数k 的比值决定. 单独的K 值仅能 B物质, 二者结合产生复合物C; 当A物质穿过B物质 on off b 描述药物与蛋白结合的状态, 而动力学参数kon和koff 后, C物质则开始离解, 再生成A和B; 进而可根据电 对于生物过程的动力学描述、靶向药物药代动力学的 泳谱图对动力学过程的记忆功能对动力学参数进行 测定以及定量亲和分析的设计都是必要的[4], 是影响 求解. ppKCE中存在以下两个假设: (1) A, B两种物质 药效发挥和药理活性的重要参数. 直接测定单独的 相互作用的结合比为 1:1; (2) 当区带A穿过区带B 时, kon和koff 的传统方法分别为停止-流动光谱和表面等离 只发生A, B两种物质的相互结合; 当区带A和B被分 子体共振法[4]. 而在停止-流动光谱中, 测定kon 值所 开后, 只发生C物质的离解反应. 但传统的ppKCE方 需的光谱变化通常不明显,